1。2实验方法

1。2。1原料预处理

将小扁豆置于电热恒温干燥箱中于 80℃干燥 54小时，冷却，粉碎过 20 目筛，备用。

1。2。2 最大吸收峰的确定 

将购买的芦丁标准品 20mg(购买的标准量即为20 mg)，用甲醇进行溶解，混合均匀，将混匀的芦丁溶液置于 100m L 容量瓶中，用甲醇进行定容，定容后的芦丁对照品溶液的浓度为 0。2mg/m L，将定容好的芦丁对照品溶液作为储备液备用。 用移液枪准确吸取 0。2mg/m L 芦丁对照品溶液 2。0m L 于 10m L 刻度比色管中，分别向比色管中加入已经配制好的 5%的亚硝酸钠溶液 0。3m L，混合均匀，置于桌面上，放置 6min，再向比色管中加入 0。3m L 配好的 10%的硝酸铝溶液，混合均匀，同样置于操作台上，放置 6min，最后用移液枪加入 4。0m L  的 10%的氢氧化钠溶液，最后用蒸馏水小心定容至 10m L，仔细摇匀，置于桌面上，静置 15min，于 450~600nm 波长处用紫外分光光度计进行扫描。

1。2。3 标准曲线的建立 

用移液枪分别准确吸取 0。2mg/m L 芦丁对照品溶液 0。0、1。0、2。0、3。0、4。0、 15 5。0m L 于 10m L 刻度比色管中，分别向各个比色管中加入 0。3m L 5%的亚硝酸钠溶液，混合均匀，置于桌面上放置 6min，再向比色管中加入 0。3m L 10%硝酸铝溶液，混合均匀，于桌面上静置 6min，最后向比色管中加入 4。0m L 配好的 10%氢氧化钠溶液，用蒸馏水准确定容至 10m L，摇匀，继续放置 15min，在 510nm处测定其吸光值，测三次取平均值[3-4]。将吸光度作为纵坐标，浓度作为横坐标指标制作芦丁标准曲线，同时对线性回归方程进行计算。

1。2。4单因素实验

1。2。4。1时间对小扁豆中总黄酮提取的影响 

准确称量过 20 目筛的小扁豆样品粉末1g，添加 70%的乙醇，料液比是 1:10，浸提温度为 70℃，设定提取时间为 1。0h、1。5h、2。0h、2。5h、3。0h，回流提取，测定不同提取时间下小扁豆中总黄酮的提取量，计算总黄酮的提取率，确定提取小扁豆中总黄酮的最适宜时间。 

1。2。4。2 温度对小扁豆中总黄酮提取的影响 

准确称量过 20 目筛的小扁豆样品粉末 1g，加入体积分数为 70%的乙醇，料液比为 1:10，提取时间为2。5h，设定回流温度为 50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，测定不同温度下小扁豆中总黄酮浸的提取量，计算总黄酮的提取率，确定提取小扁豆中总黄酮的最佳温度。文献综述

1。2。4。3 乙醇浓度对小扁豆中总黄酮提取的影响 

准确称量过 20 目筛的小扁豆样品粉末 1g，时间为2。5h，提取温度为 80℃，料液比为 1:10，设定乙醇溶液为60%、70%、80%、90%、100%，测定不同乙醇浓度对小扁豆中的总黄酮的浸提率的影响，计算总黄酮的提取率，确定提取小扁豆中总黄酮的最佳乙醇浓度。

1。2。4。4料液比对小扁豆中总黄酮提取的影响 

准确称量过 20 目筛的小扁豆样品粉末 1g，设定料液比为 1:5、1:10、1:15、1:20、1:25，浸提时间为 2。5h，浸提温度为80℃，加入体积分数 70%的乙醇溶液，测定不同料液比条件下小扁豆中总黄酮的提取量，计算总总黄酮的提取率，找出最佳的料液比。

1。2。5 正交试验 

根据单因素的实验结果，称取小扁豆样品粉末1g，选取温度、提取时间、料液比三个影响因素，以总黄酮的提取率的大小为判断标准，选用 L9(33)正交表进行正交试验，因素水平设置见表 1-1 表 

因素 水平1 小扁豆中总黄酮类化合物的功能特性研究(3):http://www.youerw.com/shiping/lunwen_87489.html