耐高温产酯酶芽孢菌的筛选及产酯酶条件与酶学特性研究(3)
其它试剂：可溶性淀粉，酚酞指示剂，95%乙醇，丙酮。
1.2 主要仪器与设备
PL601-L电子天平，梅特勒-托利多仪器有限公司生产；80-2离心沉淀器，江苏省金坛市医疗仪器厂生产；HH-S6恒温水浴锅，巩义市予华科技仪器有限公司生产；LRH系列生化培养箱，上海一恒科技有限公司生产；SYQ-DSX-280B不锈钢压力蒸汽灭菌器，上海一恒科技有限公司生产；101-型电热鼓风干燥箱，北京科伟永兴仪器有限公司生产；SW-CJ-2FD型洁净工作台，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司生产；BC/BD-426HY冰柜，河南新飞电器有限公司生产；SHSL调温电热套，上海树仁仪器仪表有限公司生产。
1.3 主要实验方法
1.3.1 耐高温产酯酶芽孢菌的活化
保存芽孢菌种冻融后，每株取2环接入30 mL种子液培养基中，37℃摇瓶培养18 h，转速为180 r/min。取种子液1环在固态活化培养基中进行四区划线，正面放置37℃培养24-48 h，直至获得纯菌落，转入试管斜面保藏备用。
1.3.2 耐高温产酯酶芽孢菌的初筛
将纯化得到的耐高温芽孢菌单菌落点种于含三丁酸甘油酯的产酯酶芽孢菌筛选培养基平板上，于55℃培养24-48 h，菌落周围有透明圈的菌株即为酯酶产生菌，并用直尺分别量取透明圈直径（R）和菌落直径（r），根据两者比值即R/r大小初步确定产酯酶能力的高低[5-9]。
1.3.3 耐高温产酯酶芽孢菌的复筛
将初筛得到的菌株接入摇瓶产酯酶发酵培养基中（挑取3环接种250 mL 装有100 mL液体培养基的三角瓶中），在55℃、180 r/min 条件下，摇床培养72 h，测定酯酶活力，酶活力高者作为复筛菌种。
1.3.4 耐高温芽孢菌产酯酶发酵条件试验
1.3.4.1 碳源的选择
改变培养基的碳源，分别用葡萄糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉为培养基的碳源，按5 g/L添加量添加到基础发酵培养基中，装料量为100 mL/250 mL三角瓶，将菌种按5%的接种于基础发酵培养基中，然后将三角瓶置于转速为180 r/min、温度为30℃的恒温摇床上培养5 d，测定酯化酶活力，活力最高者为最佳碳源。
1.3.4.2 氮源的选择
分别选择黄豆饼粉、麸皮、硝酸铵、酵母浸膏为氮源，按10 g/L添加量添加，装料量为100 mL/250 mL三角瓶，按5%的接种量接种，其它培养条件同上，测定酯化酶活力，活力最高者为最佳氮源。