1。2。1。2白芨蒴果的采集与处理

采集有120-180天的白芨蒴果，切除花梗和残留的柱头、花瓣，用70%酒精擦拭其表面干净后浸入1 g·L-1 HgCl2溶液中20分钟，在超净工作台上以无菌水清洗2-3次，吸干水分后纵剖开白芨蒴果，将种子直接撒播于已经配好的灭过菌的种子萌发培养基上，播种密度以大致白芨种子铺满培养基，白芨种子之间不宜相互重叠、覆盖，播种20瓶封口并做好标记，然后放置到24小时全天人工模拟环境培养室内发育、生长。

1。2。1。3 观察白芨种子的萌发与记录论文网

自播种那天起，每间隔一个星期去人工培养室内观察白芨的生长发育情况，主要是记录它在前期播种时有没有染菌、萌发率、形态变化等并做好实验记录。

 白芨种子在播种15天后，可以在有些瓶内清楚地观察到有少数的胚慢慢膨大并突破种皮，此时白芨种子开始萌发，光照条件下白芨种子开始由灰白变绿。但是白芨种子萌发参差不齐，播种40天后仍有白芨种子才开始萌发。最后经抽样统计，在20瓶白芨种子萌发培养基中，播种45天后，平均萌发率达86。5%。并且萌发较早的白芨种子会在它的顶端产生一个小突起，随后逐渐形成一枚子叶，继续培养则它的顶端会慢慢伸长并长出1~2枚叶片。

1。2。1。4 白芨苗的继代培养（转到继代培养基）

 白芨种子自播种60天后，白芨苗在种子萌发培养基里生长比较旺盛，已大致长满培养基且在顶端分化出叶片，但此时种子培养基内的营养元素基本消耗殆尽，可转到白芨幼苗幼芽的增殖培养基内，让其进入下一个阶段的茁壮生长。

1。2。1。5配制白芨幼苗幼芽增殖培养基

2。37g MS、250uL TDZ（6-BA）、2。5g 活性炭、15g 蔗糖、4g 琼脂、500mL 水，按上述配方，精确称量，定容到500ml的搪瓷杯内，煮沸溶解，pH值调至5。8-6。0，然后平均倒入15个玻璃瓶中，不透气膜封口，用高压灭菌锅灭菌2h，此培养基用于白芨幼苗幼芽培养。 

1。2。1。6无菌室内操作白芨苗的继代培养

在白芨幼苗的继代培养操作之前，首先打开超净工作台上的电源，依次关闭玻璃挡板，打开通风电源按钮、紫外灯灭菌按钮、室内紫外灯，然后离开房间，杀菌20分钟-30分钟，能够有效地杀死细菌和微生物，防止白芨幼苗在继代培养操作时受到污染和染菌。灭菌结束后，在外面穿上鞋套进入无菌室内，然后把事先灭菌好的白芨幼苗幼芽增殖培养基、生长在白芨种子培养基里有两个月的白芨依次放入到超净工作台内，此时台面上还有酒精灯、70%的酒精、棉球、镊子、操作刀等。首先用70%酒精把双手、台面进行彻底擦拭、消毒。点燃酒精灯，依次在酒精灯旁按照无菌操作要求把白芨幼苗接到继代培养基内，每个继代培养基内转入白芨幼苗10-15株，此过程要求细心，动作要精确，防止在操作过程中染菌。操作完成后，封口并做好标签记录，把继代好的培养基放入人工培养室内培养，然后清理台面，做后续观察和实验。

1。2。1。7继代增殖文献综述

由于白芨种子之间存在遗传差异以及外部环境等一系列因素的影响，白芨植株的生长速度有着显著差异，继代培养15天后,可以在人工培养室内清楚地观察到大部分培养基里白芨苗生长迅速，多数植株高度超过2cm，有的甚至在它的基部形成大小不等的假鳞茎。等白芨幼苗在培养基内生长一个月后，此时培养基内的营养元素已基本消耗殆尽，我们要做一个观察记录，测量一下幼苗的平均株高，统计此次操作污染掉的瓶数，计算出污染率等。然后再次配制白芨苗的继代培养基，按照无菌室内的操作要求规范对白芨幼苗继续转接，并做好标签记录，把第二次继代好的培养基放入人工培养室内培养，做后续观察和实验。