梨园丛枝菌根真菌生物多样性研究(3)
本文以南京农业大学湖熟试验站中不同品种梨为材料，通过对梨树根系中AM真菌的形态学分析研究其侵染情况，并且还研究了不同的土壤理化条件对AM真菌的影响，同时运用分子生物学技术对梨树根系中AM真菌的种类进行研究。该研究将揭示梨园中AM真菌的种质资源，为AM真菌的在我国梨产业中的应用提供研究基础。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 材料
南京农业大学湖熟梨园翠玉、翠冠、丰水、圆黄梨品种根系。
1.1.2 试剂与溶液
试剂：冰醋酸、70 %和95 % 乙醇、10 % KOH、10 % H2O2、0.2 mol/L盐酸、曲利苯蓝（Trpan blue）、乳酸、甘油、苯酚、重铬酸钾（K2Cr2O7)、浓硫酸（化学纯，比重1.54）、FeS04、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿指示剂/碘化钾、蒸馏水、氯化钾溶液、邻啡罗啉指示剂等。
溶液：FAA固定液：500ml（315 ml 70 %乙醇、135 ml水、25 ml甲醛、25 ml冰醋酸）；曲利苯蓝-乳酸酚溶液：（100 ml乳酸、100 ml苯酚、100 ml甘油、100 ml蒸馏水、0.2 g曲利苯蓝）；乳酸酚溶液：（100 ml乳酸、100 ml苯酚、100 ml甘油、100 ml蒸馏水）；邻啡罗啉指示剂：1.485 g分析纯邻啡罗啉，0.695 g化学纯硫酸亚铁（FeS04•7H2O)，100 ml蒸馏水，贮于棕色滴瓶中（此指示剂需临用时配制）。
1.1.3主要仪器设备
分光光度计、荧光显微镜、吸水纸、琼脂凝胶电泳仪、PCR仪、恒温水浴锅、研钵、烘箱、超净工作台、分析天平、滴定管、三角瓶、吸管、量筒、小漏斗、角匙、滴定台、试管夹、吸耳球、滴瓶、试剂瓶、连续流动分析仪。
1.2 实验方法
1.2.1 土壤样品采集
于2016年10月采集南京农业大学湖熟试验农场中不同品种的梨根系样品，分别为 ‘翠冠’、‘翠玉’、‘丰水梨’、‘圆黄梨’4个品种。每个品种梨选取2棵梨树，每株按照南北两个方位，去除表层土，剪取带有细根的根系，保存于无菌纸袋中立即带回实验室。一部分根系洗净后置于FAA固定液（315 ml 70 %乙醇、135 ml水、25 ml甲醛、25 ml冰醋酸）中，用于AM真菌侵染率观察；另一部分根系样品保存于-80℃冰箱中，用于根系AM真菌群落结构分析。