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库拉索芦荟凝胶汁对废电池胁迫下绿豆保护酶的影响 (3)
表2 POD活力测定加样表
反应物 对照 样品
磷酸缓冲液/mL 3.0 2.9
愈创木酚/mL 0.05 0.05
酶液/mL 0 0.1
表3 SOD活力测定加样表
试剂 用量(mL) 比色时终浓度
0.05 mol/L磷酸缓冲液 1.5
130 mmol/Lmet溶液 0.3 13 mmol/L
750 µmol/LNBT溶液 0.3 75 µmol/L
100 µmol/L EDTA-Na2液
0.3 10 µmol/L
20 µmol/L核黄素 0.3 2.0 µmol/L
酶液 0.05 对照液用缓冲液
蒸馏水 0.25
总体积 3.0
CAT的活性测定采用的是高锰酸钾滴定法,具体步骤为:称取新鲜、干净的植物材料2.5 g,加入PH7.8的磷酸缓冲液少许研磨成浆,然后转移至25 mL的容量瓶中,再用相同缓冲液冲洗研钵,并将冲洗液转至容量瓶中,最后用同一缓冲液定容。将浆液在4000 r/m条件下离心15 min,得到的上清液即为过氧化氢酶的粗提液。取50 mL三角瓶4个,在测定瓶中加入2.5 mL的酶液,在对照组加入2.5 mL的煮死酶液,然后加入2.4 mL 0.1 mol/L的过氧化氢溶液,同时计时,于30 ℃的恒温水浴中保温10 min后立即加入2.5 mL 10%的硫酸,用0.1 mol/L的高锰酸钾标准液滴定,直至溶液出现粉红色(30 min内不消失)为终点。用每克鲜重样品1 min内分解过氧化氢的毫克数表示酶活性[13]。
APX的活性的测定采用的是愈创木酚法,具体步骤为:称取5.0 g新鲜的植物材料,用蒸馏水将材料冲洗干净后用吸水纸擦干,切碎后放入研钵中,加入适量的磷酸缓冲液后研磨成浆。再将浆液全部转移到离心管中,在3000 r/m的条件下离心10 min,然后把上清液转移至25 mL的容量瓶中。接着用5 mL的磷酸缓冲液提取沉淀2次,再将提取液倒入同一容量瓶中,用磷酸缓冲液定容,将定容后的溶液置于低温条件下保存备用。取2个比色皿,按表4的要求加入各种试剂,反应体系加入酶液后,立即在34 ℃水浴中保温3 min,然后迅速稀释1倍,在470 nm波长下比色,每隔1 min记录1次吸光度,共记录5次,然后以每分钟内A470变化为1个酶活力单位[14]。
表4 APX活力测定加样表
反应物 对照 样品
磷酸缓冲液/mL 2.9 2.9
愈创木酚/mL 1.0 1.0
酶液/mL 0.1(煮沸5 min的酶液) 0.1
2结果与分析
2.1库拉索芦荟凝胶汁对废电池胁迫下绿豆幼苗POD活性的影响
POD是一种与植物生长、发育以及代谢等相关的一类酶,它能够清除过氧化氢,减轻过氧化氢对有机体的伤害,并参与植物体内对病菌、伤害等的防御和保护作用。如图1显示,在废电池胁迫的情况下,绿豆幼苗POD的活性明显降
图1 POD活力的变化
低,与清水对照组1相比降低了约34.59%,这说明废电池中的某些物质影响了绿豆幼苗中POD酶的活性,导致酶的活性降低。用一定浓度的库拉索芦荟凝胶汁(25-200 mg/mL)处理废电池胁迫下的绿豆幼苗以后,绿豆幼苗POD的活力先会随着芦荟凝胶汁浓度的升高而升高然后降低,在库拉索芦荟凝胶汁浓度为100 mg/mL时POD的活性达到最大,说明在一定浓度范围(25-100 mg/mL)内库拉索芦荟凝胶汁能够显著改善POD的活性。
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