多糖的分离、纯化工艺研究一般包括提取、除脂、脱色、脱蛋白、醇析、柱色谱分离纯化以及透析等基本步骤。多糖的提取及分离纯化直接影响到成品中多糖的纯度,从而影响到多糖类有效部位的质量控制,最终影响到成品的疗效[1]。交换柱不仅可以达到脱色的目的,而且可以通过摸索条件进行多糖的分离。双氧水(H2O2),是一种氧化脱色剂,浓度不宜过高,宜在低温下进行反应,否则会引起多糖的降解,造成多糖的损失。对于那些同时含有游离蛋白和色素的多糖,可以通过生成金属络合物的方法[2]同时除去蛋白和色素,即加入费林试剂生成不溶性络合物,分离后用离子交换树脂分离络合物。吸附法也常用,但有些多糖也被吸附,宜造成多糖的损失。对于小分子物质则可通过流水透析 48h,蒸馏水透析 24h 除去。通过脱蛋白、脱脂和透析后干燥的样品,得到的基本上是没有蛋白质与小分子杂质的多糖混合物。一般来讲,如果要得到较纯的多糖,还必须对该混合物进行进一步纯化。柱色谱可分为两类,一类是离子交换色谱[3],离子交换色谱法是利用离子交换剂上的可解离基团(活性基团)对各种离子的亲和力不同而达到分离目的的一种色谱分离技术,同时也有分子筛的作用,如DEAE-纤文素、DEAE-Sephadex、CM-Sephadex等。这种离子交换树脂常用水、缓冲液或酸碱液洗脱;一类是凝胶柱色谱[4,5],是利用具有网状结构的凝胶的分子筛作用,根据被分离物质的分子大小不同来进行分离。小分子物质能进入其内部,流下来速度慢,而大分子物质却被排除在外部,下来的速度快,当一混合溶液通过凝胶过滤色谱柱时,溶液中的物质就按不同分子量筛分开了,如Sephadex、Sepharose、Biogel等。多糖检测手段一般沿用苯酚-硫酸法[6,7],也常用 LKB 柱色谱系统,用比旋光度、示差折光及紫外检测器,各组分的峰位自动记录,分离效果好且方便。酵母多糖的结构研究进展糖的结构分类可以借鉴于对蛋白质和核酸的分析方法[8,9]。单糖是糖类的组成单元,单糖之间脱水形成糖苷键,并以糖苷键线性或分支连接成寡糖和多糖。一般将少于 20 个糖基的糖链称为寡糖,多于 20 个糖基的糖链称为多糖。寡糖和多糖的结构也可分为一级、二级、三级和四级结构。
目前对活性多糖的研究对象包括植物类、动物类、真菌类、细菌、地衣、藻类、花粉等,研究方法涉及各种化学分析及仪器分析方法,研究范围涉及多糖的分离纯化、结构分析、理化性质、免疫学、药效学、毒理学及治疗应用。多糖具有多种生理活性[12]如抗肿瘤,抗病毒,抗氧化,增强机体免疫活性等而为人们关注。
千种多糖得以分离纯化和一级结构的确定。由于多糖的结构相当复杂,因此研究多糖的构效关系十分有意义。具有何种结构的多糖才具有活性,结构的改变如何影响多糖活性,诸如此类的工作都是为了解释多糖的结构和功能的关系,是寻找具生物活性多糖和多糖药物开发的基础[10,11]。
中国第一个现代的啤酒在1903年由英国和德国酿造ShiJianLi青岛啤酒厂(青岛啤酒前身)。发展到现在我们国家已经成为世界上第二个啤酒生产国家,1999年产量超过2000吨。随着啤酒工业的迅速发展,啤酒废酵母生产也在增加。啤酒酿造中的啤酒酵母泥是一种重要的副产品,它的体积约占啤酒产量的0.15%(干固体含量)。因此如果不进行综合利用,势必造成严重的资源浪费和严重的环境污染。许多公司将废啤酒酵母泥简单干燥后变为饲料,没有做进一步的处理,仍然没有形成真正的副产品的综合利用。研究发现,不仅可用于生产啤酒,啤酒酵母,在食品和制药行业也有广泛的应用,从啤酒废酵母含有丰富的蛋白质、碳水化合物、脂肪粗纤文,矿物质和其他营养物质,酵母细胞壁75% ~ 75%的碳水化合物,8% ~ 9%的油脂和9% ~ 9%蛋白质,主要为葡聚糖和甘露聚糖,还包含大量的甘露糖蛋白。
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