5）ELISA试剂盒国内外发展现状

 国外现在知名ELISA试剂盒品牌有：Anogen；Crystal chem INC；LDN；R&D；Enzolifes等等。

 相对来说国产试剂盒不仅种类较少，而且稳定性较差。

1。2 课题现状

1。2。1 课题背景及课题目的

本课题为冠泰生物科技有限公司某品牌细胞因子ELISA检测试剂盒质控指标的验证，四个检测项目指标分别为TNF-α（肿瘤坏死因子-α）、IL-1β（白介素-1β）、IL-6（白介素-6）、human-VCAM-1（血管细胞黏附分子-1），采取的检测方法为ELISA实验双抗夹心法。

目前冠泰生物科技有限公司已经出品多种ELISA Kit，其自产细胞因子ELISA试剂盒是以国外的development kit 或者duoset，或者construction kit提供的配对抗体和标准品，HRPELISA 生产厂商技术支持）包被而成。目前为了公司转型而尝试开发其他自家试剂盒，并使用自制ELISA标准品，二抗，HRP，并采用TMB显色系统。试剂盒测试样品种类：血清，血浆，细胞裂解液，细胞上清，各种体液，组织匀浆等；测试样品种属：大鼠/小鼠/人；

本次课题的开展主要是为了测试及检验上述四种ELISA指标自家研发试剂盒性能的稳定性及准确性，并进一步改进实验流程，调整实验条件，以达到进一步提高试剂盒质量，并简化试剂盒操作的目的。

1。2。2 测定指标介绍

1）TNF-α（肿瘤坏死因子-α）

肿瘤坏死因子（Tumor Necrosis Factor，TNF）可分为TNF-α和TNF-β两种，前者来自单核巨噬细胞，后者由活化T细胞产生，是具有重要生物活性的细胞因子。存在于细胞上的TNF 受体主要有两种：TNFRⅠ和TNFRⅡ，血清中存在的是可溶性的TNFR（s TNFRⅠ, s TNFRⅡ），它们的相互作用不仅对多种肿瘤细胞有细胞毒作用，还与炎症和发热反应、关节炎、败血症及多发性硬化等疾病有密切关系[11]。

1975年Carswell等发现接种BCG的小鼠注射LPS后，血清中含有一种能杀伤某些肿瘤细胞或使体内肿瘤组织发生血坏死的因子，称为肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor,TNF)。1985年Shalaby把巨噬细胞产生的TNF命名为TNF-α，把T淋巴细胞产生的淋巴毒素（lymphotoxin,LT)命名为TNF-β。而TNF-α又被称恶质素。

TNF-α是一种单核因子，主要由单核细胞和巨噬细胞产生，LPS是较强的刺激剂。IFN-γ、M-CSF、GM-CSF对单核细胞/巨噬细胞产生TNF-α有刺激作用，而PGE则有抑制作用。前单核细胞系U937、前髓细胞系HL-60在PMA刺激下可产生较高水平的TNF-α。T淋巴细胞、T细胞杂交瘤、T淋巴样细胞系以NK细胞等在PMA刺激下也可分泌TNF-α。SAC、PMA、抗IgM可刺激正常B细胞产生TNF-α。此外，中性粒细胞、LAK、星状细胞、内皮细胞、平滑肌细胞亦可产生TNF-α。论文网

肿瘤坏死因子α（TNF-α）是一种多功能促炎细胞因子，主要由活化的巨噬细胞分泌。细胞因子被命名为其显着的能力，导致出血性坏死的小鼠肿瘤。它与多种生物学程序有关，包括全身炎症、细胞增殖、凋亡、脂质代谢和凝血。这是有据可查的，TNF-α功能通过其受体TNFR1和TNFR2来进行表达。

肿瘤坏死因子-α在细菌免疫应答、某些真菌、病毒、寄生虫入侵、组织重塑、自身免疫性疾病和特定肿瘤坏死中起重要作用。肿瘤坏死因子-α调节的多效性是由于其同时触发多种信号通路的能力。肿瘤坏死因子-α超表达对某些细菌如LPS的反应可引起危及生命的感染性休克。重组肿瘤坏死因子-α，联合化疗，进行协同处理软肉瘤，黑色素瘤和其他恶性肿瘤。抗TNF-α治疗已用于类风湿关节炎的治疗[12]。