分光光度法1 NaNO2-Al(NO3)3法此法的显色原理是黄酮与NaNO2、Al(NO3)3、NaOH试剂在黄酮B环的3,4-邻二酚羟基部位反应产生红色物质,以芦丁为标准溶液,在510nm波长下测定黄酮类物质的含量。后来发现这并不是黄酮类物质的专属反应,因为凡具有邻苯二羟基结构的物质,均能用此法进行显色定量。据文献报道,荞麦中的原儿茶酸、原花色素等都具有邻苯二羟基结构,使该法的测定结果偏高。
2 AlC13法
此法原理是AlC13与黄酮3-和/或5-羟基,或者B环的3,4-邻二酚羟基络合生成黄色的黄酮铝配合物。在用AlC13进行显色定量法测定时,芦丁、桑色素等黄酮类物质反应强烈,而对酚酸、原花色素反应很小,因此该法对黄酮类物质的专属性较强,具有较高的准确度。徐宝才[22]等比较了定量测定苦荞黄酮的两种比色方法,通过与HPLC测定结果对照、对其影响因素的探讨以及方法评价,提出AlC13比色法比常用的NaNO2-Al(NO3)3法更适于苦荞黄酮含量的测定。
2 高效液相色谱法[16]、[23]
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)法即以高压液体为流动相的液相色谱分析法。其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱中,经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器,由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。该方法具有分离效果好、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用范围广、色谱柱可反复使用的特点,并且适应于高沸点、大分子、强极性和热稳定性差的化合物的分离分析,已成为天然活性物质含量测定最常用的分析方法。目前,高效液相色谱法是测定黄酮类物质的有效方法,该法可以直接分析黄酮苷的含量,也可以通过水解后分析黄酮苷元含量,再通过转化系数求得黄酮总含量。可是一般天然植物中黄酮类物质种类较多,测定每种黄酮成分的含量较为复杂,且绝大多数标准化合物不易得到,因而此法应用有限。22198
在黄酮类物质含量的测定中,反相液相色谱最为重要,一般使用的流动相是水/甲醇或者是水/乙腈系统,而且梯度洗脱的效果更好,为了解决峰形拖尾现象,可以在流动相中加入少量酸,如乙酸、甲酸、磷酸或高氯酸等调节pH值,但是酸不可以加得太多,否则会对仪器造成腐蚀。然而高效液相色谱仪存在的缺点主要是价格昂贵,而且在分析一些复杂混合物时表现出分析时间长,分离效率低,色谱柱容易被污染,且污染后难于清洗,柱的使用寿命短等不足。王改玲[24]等研究在不同的提取条件下提取苦荞黄酮后,采用高效液相色谱法定量分析,检测波长361nm,流动相65%,甲醇(含0.5%冰乙酸),流速0.8ml/min-1,进样量20ul,以芦丁为标样,相对含量采用峰面积归一法,确定了最佳的提取方法应该是以90%乙醇为溶剂进行热回流提取。 论文网
高效毛细管电泳法
高效毛细管电泳(High-performance Capillary Electrophoresis,HPCE)是一种离子域和电离子在电场驱动下,在毛细管中按淌度和分配系数不同而进行高效快捷分离的新技术。该技术的特点是采用熔融石英毛细管(10100wm),毛细管至检测池的最小接口长度为30cm,其内壁可以涂布或不涂,分离分析的主要驱动力为可高达30kV的高压电。在分析中,各个被分离组分通过在线检测方式检测。HPCE以其高效快速、分辨率高、检测方便、进样量少、分离模式多的特点在生命科学、生物技术、药物和环境科学等领域有着广泛的应用前景。毛细管电泳以其电泳迁移技术的差异可分为:毛细管区带电泳、胶束电动毛细管色谱、毛细管等速电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电焦聚焦五种类型。侯建霞[25]等用毛细管电泳-电化学检测的方法分析了苦荞芽中的黄酮类物质,分别测定了表儿茶素、芦丁、槲皮素的含量,在最佳条件下,检出限分别为1.83×10-7g/l,2.9×10-8g/l,1.00×10-7g/l。 苦荞黄酮类物质测定方法研究现状:http://www.youerw.com/yanjiu/lunwen_14716.html