病毒载体PVX-Abi和PVX-CRT的构建

摘要本研究通过 PCR 扩增目的基因 SlAbi 和 SlCRT 部分基因片段，利用酶切连接等手段将上述目的基因片段克隆到植物病毒载体 PVX，得到重组病毒沉默载体 PVX-Abi 和 PVX-CRT，并进行测序验证。进一步利用体外转录系统，得到大量的病毒沉默载体 PVX-Abi mRNA 和 PVX-CRT mRNA，并摩擦接种至 1 月龄的烟草（含 5 片真叶）新生叶片上。2 周后，收集出现卷曲、退绿等症状的病枝叶，为后续通过沉默脱落酸 ABA 合成相关基因 SlAbi 和 SlCRT 在番茄果实内的表达，从而揭示它们在番茄种子发育和休眠中的作用奠定基础。88908

毕业论文关键词：番茄；病毒载体； PVX-Abi； PVX-CRT

Abstract In this study, the specific gene fragments of SlAbi and SlCRT were amplified by PCR, and then cloned into plant virus vector PVX and verified by sequencing。 The recombinant viral plasmid PVX-Abi and PVX-CRT were linearized by SpeI, and transcribed into PVX-Abi mRNA and PVX-CRT mRNA in vitro, respectively。 After that, the mRNA was immediately inoculated to the young leaves of one-month old N。 benthamiana with about 5 true leaves。 At 2 weeks post-inoculation, N。benthamiana leaves with a symptom of curling and chlorosis were collected and kept at -80oC until use。 Via silencing the expression of ABA-synthesis related genes SlAbi and SlCRT in tomato fruits by the construction of viral vector PVX-Abi and PVX-CRT, it will help to elucidate the role of SlAbi and SlCRT in regulating seed development and dormancy in tomato。

Keyword: tomato； viral vector； PVX-Abi； PVX-CRT

1 引言 1

2 实验材料源Y于U优I尔O论P文W网wwW.yOueRw.com 原文+QQ75201-8766 及方法 2

2。1 实验材料 2

2。2 仪器和设备 2

3 实验方法 2

3。1 实验材料栽培 2

3。2 目的基因片段的获得 2

3。3 目标基因片段和病毒载体 PVX 酶切处理 3

3。4 连接反应 4

3。5 菌液 PCR 检测 5

3。6 体外转录、摩擦接种 5

4 实验结果 7

4。1 Abi 和 CRT 目的基因片段克隆及酶切处理 7

4。2 病毒载体 PVX 酶切处理及回收 8

4。3 重组质粒 PVX-Abi 和 PVX-CRT 构建及检测 8

4。4 重组质粒 PVX-Abi 和 PVX-CRT 线性化及体外转录 9

4。5 病毒沉默载体接种烟草 10

5 讨论与分析 11

6 参考文献 11

7 病毒载体PVX-Abi和PVX-CRT的构建:http://www.youerw.com/yixue/lunwen_173531.html