2.3.2 原料路线的选择和生产方法的可行性
以上四条合成路线，以第一个条件最为温和，产率也最高，反应历程如下[14~16]：
2.3.3 小试
把28.64g二酸溶于200ml无水甲醇中，溶解后加入45.1ml三甲基氯硅烷，搅拌12h，加入40ml乙酸乙酯和40ml水，分液，水相用乙酸乙酯萃取三遍（10ml/每次），混合后油相先用0.5mol/L  NaHCO3溶液洗三遍，再用水洗三遍（10ml/每次），用无水Na2SO4干燥，过滤结晶，用无水甲醇重结晶，过滤干燥，得产物26.28g,产率：86%。
3试验方法与材料
3.1 实验材料
3.1.1 主要试剂
表3.1 主要试剂表
试剂    级别    生产厂家
无水甲醇    A.R.    上海凌峰化学试剂有限公司
三甲基氯硅烷    化学纯CP    国药集团化学试剂有限公司
正己烷    A.R.    国药集团化学试剂有限公司
乙酸乙酯    A.R.    国药集团化学试剂有限公司
碳酸氢钠    A.R.    国药集团化学试剂有限公司
磷酸二氢钠    A.R.    上海凌峰化学试剂有限公司
磷酸氢二钠，二水    A.R.    国药集团化学试剂有限公司
葡萄糖    A.R.    上海凌峰化学试剂有限公司
琼脂粉    B.R.    国药集团化学试剂有限公司
氯化钠    A.R.    江苏强盛化工有限公司
胰蛋白胨    A.R.    日本佐藤制药株式会社
酵母粉    A.R.    国药集团化学试剂有限公司
3.1.2主要仪器

表3.2 主要仪器表
名称    型号    生产厂家
洁净工作台        上海汇龙仪表电子有限责任公司
高速仪式冷冻离心机    TGL-20000CR    上海安亭科学仪器厂
紫外可见分光光度计    7504    上海菁华科技仪器有限公司
电子天平    AL104    梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司
台式高速离心机    H1650-W    长沙相仪离心机仪器有限公司
立式压力蒸汽灭菌器    LDZX-30FBS    上海申安医疗器械厂
自动电位滴定仪    ZD-2    上海仪电科技学仪器股份有限公司
柱箱    HCT-360    天津恒奥科技发展有限公司
液相色谱仪    515    沃特世科技（上海）有限公司
电热恒温培养箱    DHP-9082    上海一恒科技有限公司
电子天平    JH2102    上海精密科学仪器有限公司
漩涡混合器    XW80A    江苏海门市其林贝尔仪器制造有限公司
电热鼓风干燥箱    DHG-9070A    上海一恒科技有限公司
3.2试验方法
3.2.1优化前培养条件
LB培养基(g/L)：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，琼脂粉20 g/L，pH=7.0
种子液培养基(g/L)：胰蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，氯化钠10g/L，pH=7.0
发酵液培养基(g/L)：酵母粉15g/L，七水硫酸镁1 g/L，葡萄糖15 g/L，pH=7.5
种子液培养：自平板取一环菌体，无菌接入装液50mL培养基的250mL摇瓶中，30℃，180rpm培养48h。
摇瓶发酵培养：250mL摇瓶，装液量为50mL，按10%(V/V)的接种量接入种子液5.0mL，在30℃，180rpm条件下培养48h。 年产200吨生物素中间体二酯的合成工艺以及生产车间设计(5):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_3353.html