致  谢 25

参考文献 26

1 引言

癌症是导致世界人口死亡的主要原因之一，它就是局部细胞不受控制的大量增殖成瘤，最后远处转移而发展为恶性，这是导致世界人类死亡的主要原因之一[1]。肿瘤在转移过程中，与其他胞外分子或者宿主细胞等相互作用，并成功入侵血液和淋巴细胞，破坏免疫系统，大量增殖[2]。由目前统计可知，恶性黑色素瘤在皮肤病中的发病率不到5%，然而致死率却高达80%。并且发病率在不断增加，目前死亡率仅仅低于成人白血病[3]。因此，其具体的发病机理值得我们深入研究。

在本实验中，我们选用新兴的代谢组学方法，将正常小鼠表皮黑色素细胞与黑色素瘤细胞B16F10的代谢物进行统计学分析，科学地提供了胞内的代谢轮廓，从分子机制揭示正常黑色素细胞与黑色素瘤细胞的代谢通路的区别，有助于为黑色素瘤寻找潜在的分子标记物。

1.1 黑色素细胞作用与检测

黑色素细胞（melanocyte）是一类具有特殊功能的细胞，开始来源于胚胎外层的神经嵴，胚胎发育初期逐步转移至表皮和毛囊等处[4]。黑色素细胞分布范围广，但数量只占表皮细胞的5%不到，分离原代细胞容易污染。黑色素细胞可以分泌黑色素，保护邻近的角质形成细胞。黑色素停留在其细胞核上，可以保护皮肤免受紫外线辐射[5]，因而黑色素合成与代谢平衡才能保障人体正常与健康的肤色。皮肤局部黑色素细胞若损毁或缺失，会导致常见的白癜风症状，此病困扰着全球约8%的人口，严重的人生活质量低下，甚至带有心理问题[6]。当黑色素细胞不受控制地增长与扩散成瘤，即会形成黑色素瘤。

黑色素的合成是在酪氨酸酶的催化作用下，酪氨酸经羟化成为多巴，多巴再进一步氧化，成为多巴醌，之后异构而成为黑色素。因而黑色素细胞的检测原理是利用此过程中酪氨酸酶的特异性，在细胞培养过程中加入左旋多巴，这样就会合成大量的黑色素，可以在倒置显微镜下观察到黑色的细胞，此为最常用的多巴染色法。（Dopa染色法）[7]

1.2 恶性黑色素瘤简介

1.2.1 黑色素瘤概述

恶性黑色素瘤（Malignant melanoma），是由皮肤正常的黑色素细胞病变而来。虽然其在皮肤病中比例不高，但黑色素瘤非常容易发生远处转移至肺部、脑部，因而死亡率极高。黑色素瘤的发病率也在连年增长，全世界增长率达3%以上。然而黑色素瘤的病因仍未完全清楚，因而治疗也为棘手的难题。目前的研究提示，其发生与下列危险因素有关：种族、基因、环境及局部外伤等。但具体代谢机制仍有待研究。

1.2.2 黑色素瘤的病理表现

恶性黑色素瘤细胞形状多样，有圆形、梭形和多边形等。含有丰富的胞浆，其中包含细小黑色素颗粒，因而肿瘤最初是在皮肤表面出现棕色或黑色小点，颜色逐渐加深并出现结节，边缘隆起不规则，瘤体边沿不清，易溃疡、出血，短期内迅速增大，达到数厘米。瘤细胞依据其生长方式不同，分类为辐射生长期和垂直生长期两类。早期阶段，细胞在表皮与真皮层之间以圆形蔓延，此阶段为辐射增长期，时间长达数年；后期阶段，肿瘤会向真皮层和组织深处生长，此阶段为垂直生长期。此过程极易发生转移而发展为恶性黑色素瘤。在垂直生长期，可用浸润深度来确定肿瘤的转移程度和病变厚度，以毫米为单位，来估量其危险度。

1.2.3 黑色素瘤治疗现状与进展 黑色素细胞与黑色素瘤细胞的代谢组分析(2):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_50123.html