本论文的实验就是综合采用生物化学、微生物学、遗传学等现代科学技术，在生物体外对生物大分子的DNA进行剪切加工，让它与不同的cDNA分子基因进行重组，并将它引入大肠杆菌宿主细胞中去，通过复制、转录、翻译，达到此生物DNA在大肠杆菌中的大量表达，也就是说将亚麻-（R）HNL cDNA 克隆到原核表达载体HNL-At中。

    人类基因组计划主要包括功能性CNA测序和基因组DNA测序两部分。为了获得新的基因，得到更完整的cDNA克隆，使得cDNA文库质量尤为重要。mDNA通过逆转录得到cDNA ，cDNA文库的构建是基因组工作中的重中之重。近来，cDNA逆转录后对其大小进行分级的这种凝胶电泳法，也备受研究人员关注，这种只回收分子量较大的片段的方法，可以使cDNA库的总量减少，使得文库中较大插入片段的比例得以提高，也方便于较大基因的克隆。cDNA文库的构建，共分为四步：第一步，mRNA的分离；第二步，cDNA第一链的合成；第三步，cDNA第二链的合成；第四步，克隆双链cDNA入载体并导入E。coli。

质粒是一种独立于染色体以外的稳定遗传因子，是重组DNA技术中最为常见的。作为一个闭环双链的DNA分子，以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒依靠宿主细胞编码的某些酶和蛋白进行转录和复制，没有了宿主细胞则不能复制，但是质粒并不是宿主细胞存活的必要条件。质粒在细胞内有紧密控制型和松弛控制型两种类型。紧密控制型只在细胞规定的周期进行复制，不能在染色体不复制的时候进行复制，大多数情况每个细胞中仅有一个或几个质粒存在。松弛控制型的质粒可以再整个细胞中随时进行复制，每个细胞一般有20多个拷贝。

质粒DNA作为一种基因运载工具，在现代分子生物学中的应用前景及其广泛，生物试验中最近本的工作就是质粒DNA的提取与纯化，因为它直接联系着实验的成功。科研人员对天然质粒进行了改造，克服了载体存在的不同程度的局限性，发展出了一批多选择记号、高拷贝数、低相对分子质量的质粒载体。质粒具有不亲和性和不相容性，所以大肠杆菌中一般不能同时含有两种由松弛控制型的质粒。本论文的实验就是利用质粒作为基因克隆的载体分子，获得批量的纯化质粒DNA分子，带有质粒的大肠杆菌中，除了质粒以外，还有其他的DNA和RNA基因组的存在，而且含有蛋白质、脂质等物质。按照培养细胞大量扩大质粒、收集和分裂酶并且除去蛋白质和染色体的DNA、分离和纯化质粒DNA三个步骤将混合物中的质粒DNA提取出来。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

酶性质的一个重要参数就是酶活力，象征着酶作为催化剂分离底物的能力强弱。用紫外分光光度计来测定酶活，准确性和重现性较高。且此方法的测试仪器和步骤简单，容易学习操作。酶活单位的含义就是在一定PH值和温度下，每1mL酶液中在1min内，水解产生的络氨酸的一个酶活单位，用（U、mL）表示。这是国内最常见的酶活性的表达方式，主要方便于酶活力数据的换算与比较。

本实验采用SDS-PACE（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,十二烷基硫酸铵-聚丙烯酰氨凝胶电泳），用于分离蛋白质和测定蛋白质亚基相对分子质量。聚丙烯酰胺凝胶有弹性、透明化学性质稳定，强度好，在不同温度和pH下变化较小，是在很多溶液中都不溶的非离子型。在现代生物实验中应用及其广泛。

1．醇腈酶的概况

醇腈酶或羟基腈裂解酶（Hydroxynitrile Lyase，Oxynitrilase，HNL），因为最初是在杏仁中被发现的，所以有的时候也称作苦杏仁腈酶，作为一种催化剂，广泛存在于一万多种植物中，是植物用来抵御外敌的关键酶。 源自亚麻R-醇腈酶异源重组表达工艺的优化(3):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_81776.html