在使用过程中一旦发现异常，应及时断电，停止使用；

定期请专业人员进行灭菌器压力表的安全检测。

1。6 Ecoli的活化

所用菌株为感受态E。coli，放置在标有名称日期的Ep管中，保存在-80℃的冰箱里。

将灭菌后的液体LB培养基冷却至不烫手，然后逐一倒入平板中，待冷却，备用。

接种的整个过程都是在无菌操作台上完成的，实验前，提前将实验台的紫外打开，照射20min，然后关闭紫外，打开日光灯和风机开关。

取出所需的菌株、移液枪、试管、LB液体培养基，放在无菌实验操作台上，然后点燃酒精灯，用酒精擦拭双手，试验台也擦拭干净，清除可能存在的杂菌，做到真正的无菌操作。用移液枪向试管中加入3mlLB液体培养基，将接种环放在酒精灯上燃烧，当接种环被烧成红色时，把存放有菌株的Ep管放在酒精灯旁边，打开盖子，待接种环冷却下来后，将接种环慢慢放入管中，取出一点菌种，接于试管中，收拾干净操作台，用记号笔在试管上标记好菌名和日期，将试管放在37℃的培养箱中，过夜摇床培养，剩余感受态菌种放回原处保存。。

第二天将培养好的试管取出，与待用培养基平板，一起放在无菌实验操作台上，然后点燃酒精灯，做好无菌措施，将接种环放在酒精灯上燃烧，当接种环被烧成红色时，把试管放在酒精灯旁边，打开塞子，待接种环冷却下来后，将接种环慢慢放入管中，蘸取一点菌种，然后在酒精灯旁把塞子塞上，放在一边。来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com

把准备好的待用平板放在酒精灯旁，打开盖子，把接种环放进去，进行三区划线。

第一区：先用左手托起平板，用中指、无名指和小拇指托起平板的底部，并且要注意保持水平，用食指和拇指捏住平板上盖，一端微微张开一小口，不要太大，以接种环方便进入划线为宜。千万注意，一定要在酒精灯的火焰旁操作。接种环可以在一区来回反复的划线，线一定要密。划完一区后，要将接种环放在火焰上灼烧至红，使接种环上的菌全部被杀死。

第二区：接种环灼烧过后，现在平板上靠一靠冷却一下，再在第一区交叉一点点，然后不要再接触到第一区，第二区划线也要密。首先不冷却一下，菌会被烫死，其次二区划线交叉太多不易划出单菌落。

第三区：和第二区操作相同，但是第三区的线一定要稀疏。且在划第三区线之前接种环也要灼烧。划完后，盖上平板，把接种环放在酒精灯上灼烧，以免残留菌种，然后放回原处，用酒精灯的盖子盖灭火焰，关闭灯光和风机开关，最后将电源开关关上。

用记号笔在平板上标注菌种名称和日期，将划好的平板用袋子装好，然后把平板放入37℃的培养箱，倒置培养18h。