表2-4 空白辅料不同波长吸光度值
编号 波长(nm) 吸光度(Abs)
1 282.40 0.051
2 249.80 0.027
通过图2-3空白辅料的扫描结果,在218nm处,辅料吸收较大,也会若选用此最大吸收波长进行测定,辅料会对API的测定结果产生较大干扰,要减小干扰,API更灵敏地显示,应选择API有较大吸收波长,而辅料对其吸收影响较小。结合图2-2及2-3可知,确定检测波长为230nm。
2.3 线性研究(标准曲线的制备)
2.3.1 标准曲线制备方法
线性系指在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。范围系指能达到一定精密度,准确度和线性测试方法适用的高低浓度或量的区间。
精密称取10mg原料于100ml容量瓶中,用pH=6.8磷酸盐缓冲液溶解,超声,用pH=6.8磷酸盐缓冲液超声溶解并定容至100ml容量瓶刻度线,作为母液(100μg/ml)。
再从母液中分别量取1ml、3ml、4ml、6ml、7ml于100ml容量瓶中,用pH=6.8磷酸盐缓冲液稀释,并定容至100ml容量瓶刻度线,分别制成1μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、6μg/ml、7μg/ml的溶液。以pH=6.8磷酸盐缓冲液作为空白溶液,调整基线,在检测波长230nm处测定系列标准溶液的吸光度值。
将上述不同浓度梯度的溶液,由浓度低到高,用紫外分光光度计分别测得相应的吸光度值,然后以浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标,绘制标准曲线。
图2-4 标准曲线
表2-5 各个系列标准曲线溶液的吸光度测定值
编号 浓度(μg/ml) 吸光度(Abs)
1 1.035 0.114
2 3.105 0.331
3 4.140 0.452
4 6.210 0.675
5 7.245 0.794
2.3.2 标准曲线的测定结果
由图2-4,以浓度和吸光度值进行线性回归,可得线性方程:
A=0.10952C-0.00286,相关系数为r=0.99989>0.999。
可见,API在1.035-7.245μg/ml浓度范围内,吸光度值与浓度呈线性。本试验的线性范围和相关系数,均符合标准要求。该分析方法线性关系良好。
2.4 回收率
2.4.1回收率的测定方法
回收率是用以表征方法学准确度的,目的是查看制剂工艺和辅料是否有干扰。一般计算溶出度的回收率的方法是按照溶出结果的50%、80%、100%来确定回收率试验的API浓度。并按照API的量加入相应处方量的辅料(糖丸芯、Talc、HPMC)。精密称取2mg、3.2mg、4mg的API各三份于100ml容量瓶中,并加入辅料,用pH=6.8磷酸盐缓冲液溶解,超声30min,并定容至刻度。取约10ml上述溶液于离心管中,离心15min,使溶液至澄清。用移液管移取上清液1ml于10ml容量瓶中,用pH=6.8磷酸盐缓冲液定容至刻度。用紫外分光光度法,在检测波长230nm处测定吸光度,计算回收率。
2.4.2回收率的测定结果
表2-6 回收率测定值
编号 实测值(μg/ml) 称量值(μg/ml) 回收率(%) 平均回收率(%)
1 1.986 2.02 99.32
99.17
2 2.015 2.06 97.82
3 2.010 2.04 98.53
4 3.220 3.25 99.08
5 3.190 3.20 99.69 难溶性药物肠溶微丸胶囊质量研究(6):http://www.youerw.com/yixue/lunwen_989.html