为了开发有效的吸附材料,让生物催化剂在制备工业得以使用,开发高效的可再生的酶吸附固定材料迫在眉睫,因而研究资源丰富的天然物,特别是可再生的天然废弃物进行加工,制备固定化酶载体材料,将对充分利用自然资源、进行可持续发展具有十分重要的经济价值。
在南方地区大量种植且是我国的主要水果之一—柚子(Citrus maxima)的可食率在46%—56%[9]。一般情况,柚子皮会未被利用而丢弃,一方面造成了浪费,另一方面污染环境,给社会带来了负面影响。如果这些柚子皮能被利用起来当作载体材料吸附剂,这对废物的再利用具有重要意义。
本文以柚子皮为原料制备吸附剂材料,以中性蛋白酶为吸附质,考察吸附时间、吸附温度、吸附质初始浓度为影响因素的基础上,重点研究吸附酶对蛋白质水解性能,以确定柚子皮制备材料作为酶固定剂的可行性,这一研究旨在为柚子皮的科学利用提供参考据。
2 实验部分
2.1 化学药品和吸附材料
表1. 化学药品
药品名称 规格 生产厂家
考马斯亮蓝G-250 AR 上海浩然生物技术有限公司
乙醇 AR
磷酸(85%) AR
中性蛋白酶 AR 上海实意化学试剂有限公司
牛血清蛋白 AR 国药集团化学试剂有限公司
柚子皮吸附材料 AR
2.2 仪器设备
表2. 实验仪器
仪器名称 生产单位
水浴恒温振荡器 常州国华仪器有限公司
UV优尔GD紫外可见分光光度计 上海欣益仪器仪表有限公司
GZX—9146MBE数显鼓风干燥箱 上海博迅有限公司医疗设备厂
精密试纸 上海三爱思试剂有限公司(原上海试剂厂)
2.3 柚子皮吸附材料
来源:本实验所使用的柚子皮吸附材料来自淮阴师范学院化学化工学院1006班沈茜茜和徐慧同学的实验成品。
方法:将柚子内皮放入沸水中,煮沸,至相邻几次的水溶液颜色不变,抽滤,然后置于100℃烘箱中烘干24h得样品P1,将P1粉碎,随即筛分到粒径大小为500μm,置于干燥容器中储存备用。
2.4 试剂配制
准确称取50 mg考马斯亮蓝G-250,溶于25ml 90%的乙醇中、加入85%(W%)的磷酸50ml,最后用去离子水定容到500ml。此溶液在常温下可放置一个月。
准确称取2.500g分析纯的中兴蛋白酶固体粉末,溶于250ml的容量瓶中,加去离子水至刻度线,摇匀,静置,得到0.010g/ml分析纯的中性蛋白酶溶液,使用时再按准确比例稀释成相应浓度的溶液。
准确称取100mg牛血清蛋白,溶于100ml去离子水中,得到1000μg/ml的原液。
除非另有说明,所有其他化学品都是分析纯的。
柚子皮吸附剂对中性蛋白酶的吸附性能及吸附酶活性研究(2):http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_64537.html