人肌肉浆网受磷蛋白Phospholamban原核表达与质谱分析

摘要人体肌肉浆网受磷蛋白——Phospholamban（PLN）是一种内膜蛋白，由52个氨基酸组成，能在心肌和骨骼肌中直接抑制肌浆网钙泵-Ca2+-ATPase(SERCA)的产生。受磷蛋白（PLN)）通过减少SERCA与Ca2+的结合来，从而减弱SERCA的功能性，然而磷酸化后的受磷蛋白能减少对SERCA的抑制作用。但蛋白质作用于蛋白质的分子机理至今还上不清楚，因此受磷蛋白的聚合状态，磷酸化以及与膜脂分子结合的等，一直是人们关注的焦点。构建含有HB标签的受磷蛋白(PLN)的表达载体，本实验采用分子克隆的方法，并转化入大肠杆菌表达株系BL21（DE3）中，尝试进行受磷蛋白PLN的表达纯化，以期获得高纯度的毫克级的PLN，为PLN的作用机理的质谱分析奠定基础。78032

Title Phosphoprotein prokaryotic and mass spectrometric

analysis of muscle sarcoplasmic reticulum by people。

Abstract Human muscle sarcoplasmic reticulum by phosphoprotein, cardiomyocytes (PLN) is a membrane protein, composed of 52 amino acid, can in the myocardium and skeletal muscle directly inhibits muscle sarcoplasmic reticulum calcium pump -Ca2+-ATPase (SERCA)。 Phospholamban (PLN) through reduction in SERCA and Ca2+-binding, thereby weakening of SERCA function。 However, phosphorylation by phosphoprotein can reduce the inhibition of SERCA。 But interacting proteins in the molecular mechanism of protein so far is not clear, therefore phospholamban polymerization state, phosphorylation and binding to the membrane lipid molecules, has been the focus of people's attention。 Constructs containing the HB tag by phospholamban (PLN) expression vector, this experiment using molecular cloning method and transformed into Escherichia coli expression strain BL21 (DE3), try for the expression and purification of phosphoprotein PLN, in order to obtain high purity mg of PLN, PLN to use the mechanism of mass spectrometry analysis lay the foundation。

Keywords Molecular cloning molecular mechanism phospholamban protein-expression

1 绪论 1

1。1 受磷蛋白概述 1

1。2 受磷蛋白的结构特点 1

1。3 受磷蛋白的功能特性 2

1。4 受磷蛋白磷酸化作用 3

1。5 受磷蛋白的研究及其意义 3

1。6 受磷蛋白 4

1。7 基因克隆 5

1。7。1 基因克隆技术 5

1。7。2 基因克隆技术的发展历程 6

1。8 本课题拟研究内容 6

2。实验材料及方法 7

2。1 材料 7

2。1。1 菌种 7

2。1。2 质粒人肌肉浆网受磷蛋白Phospholamban原核表达与质谱分析:http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_89802.html