7
2。1。3 工具酶和试剂盒 7
2。1。4 分子量标准 7
2。1。5 培养基 7
2。1。6 缓冲液以及其他溶液 7
2。1。7 主要仪器及设备 8
2。2 实验方法 9
2。2。1 实验具体流程 9
2。2。3 基础实验操作 11
3 实验结果 15
3。1 DNA 浓度检测 15
3。1。1 质粒 DNA 的浓度检测 15
3。1。2 凝胶回收质粒 DNA 浓度的测定 16
3。1。3 转化后质粒 DNA 浓度的测定 17
3。2 转化实验对照检测 18
3。3 酶切回收 18
3。4 酶切验证 19
第 Ⅱ 页
本科毕业设计说明书
4 结论 21
5 课题展望 21
致 谢 22
参考文献 23
1 绪论
随着经济的发展社会的不断进步,人们在满足衣食住行之后,开始把目光放 在身心的健康发展上,人们越来越关注自己健康。然而环境的污染,包括空气污 染,水污染,土壤的污染,以及生活得快节奏,高强度的工作,巨大的工作压力, 也使人类健康受到巨大的威胁,各种疾病屡见不鲜,甚至肆意传播。科研人员对 各种疾病的研究也渐渐深入和全面,科研人员开始从生物分子的层面对人类的生 理原理进行更深层次的探究,其中基因疗法是对抗疾病的种独特的新方法。犯病 时,对关键性的起作用的蛋白质和基因为靶点进行治疗,另外在遗传病中,还能 够弥补基因先天性缺陷,这对从根源治疗疾病也有其重要意义[1]。膜蛋白是嵌在 生物膜中的一种蛋白质,是生物膜功能的主要体现者和承担者,因此膜蛋白可以 作为许多药品分子的靶点,膜蛋白根据其所处的位置,可分为外周膜蛋白,内在 膜蛋白,和脂锚定蛋白[2]。受磷蛋白(PLN)便是其中的一种内膜蛋白,它在心 血管疾病方面有重要研究意义。通过高分辨率的质谱可以实现破译它的调节控制 机制。然而这项研究的基础,就是获得毫克级的高纯度的受磷蛋白。
1。1 受磷蛋白概述
受磷蛋白是一种跨膜蛋白,在肌浆网中进行表达,它是心脏心肌收缩和β- 肾上腺素的基本调节蛋白[3]。它能抑制钙泵—Ca2+-ATPase(SERCA)的活性, Ca2+-ATPase 是一种小的膜蛋白。受磷蛋白通过控制 Ca2+-ATPase 的活性来控制 心肌细胞中 Ca2+的循环,如果人类身体里 Ca2+的循环失常,就可能会引发各种心 血管疾病。而对受磷蛋白实施可逆的磷酸化作用将会取消这种抑制作用,这就为 各种心理疾病的治疗找到了突破口。 人肌肉浆网受磷蛋白Phospholamban原核表达与质谱分析(2):http://www.youerw.com/huaxue/lunwen_89802.html