番茄MPK2基因烟草遗传转化体系的建立
时间:2018-03-02 20:58 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
| 摘要：为建立高效快速的番茄MPK2基因烟草遗传转化体系。首先珊西烟草无菌苗的培养与再生，制备根癌农杆菌感受态，将质粒pCAMBIA2301-MPK2导入到根癌农杆菌中。然后通过根癌农杆菌介导法，卡那霉素的筛选以及多代培养得到MPK2的转基因烟草。最后提取转化烟草叶片DNA，进行PCR扩增并鉴定。本试验总结了已有的经验建立高效快速的番茄MPK2基因烟草遗传转化体系，对进一步探索番茄MPK基因功能与作用及其应用作出一定的贡献。10972 关键词：MPK2基因；烟草；PCR；转化 Establishment of Tomatoes MPK2 Gene Tobacco Genetic Transformation System Abstract：The article was to establish a efficient and rapid tobacco genetic transformation system of tomato MPK2 gene. First, Nicotiana tabacum cv. Xanthi-nc sterile plants were cultivated and regenerated. After preparing Agrobacterium tumefaciens competent cells, we transfered the plasmid pCAMBIA2301-MPK2 into the Agrobacterium tumefaciens. Then, though Agrobacterium tumefaciens-mediated , kanamycin and generational cultured, we got transformational tobacco. Finally, we extracted, amplified and identified the DNA of the transformational leaf by polymerase chain reaction (PCR). The research summarized the existing experience to establish efficient rapid tobacco genetic transformation system of tomatoes MPK2 gene, to further explore the tomato MPK genes function and to make certain contribution in the application. Key words: MPK2 gene; Tobacco; Polymerase chain reaction; Transformation 目 录 摘要 1 Abstract 1 引言 1 1材料与方法 3 1.1试验材料与仪器 3 1.2 试验方法 3 1.3转基因植株的获得及筛选 4 2 结果与分析 5 2.1转基因烟草的再生状况 5 2.2 转基因烟草植株的获得及初步筛选 5 3 讨论 6 参考文献 6 致谢 8 番茄MPK2基因烟草遗传转化体系的建立 引言 植物的MAPK(mitogen-activated protein kinases，MAPK)基因包括A族、B族、C族和D族等4类。MPK2基因属于C族MAPK基因[1]，MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)链是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，MAPK通路也可以将植物体外的刺激转入植物细胞胞内并引发细胞应答，从而影响细胞的基因表达，细胞的生长发育，细胞的分裂、分化及凋亡[2]等多种生理生化反应过程。近年来通过对拟南芥MAPK基因家族的研究，其他植物中的很多MAPK基因的种类也已被区分其作用也被揭示。不同的胁迫刺激因子如病原菌感染、损伤、高温、低温、干旱、渗透压、紫外线、臭氧和活性氧等都可以作为大部分克隆出来的MAPK基因的激活剂。很多仪器和方法已被用于的功能的研究，以及对植物MAPK基因在不同环境胁迫下的信号传导途径的探索。植物中，MAPK基因主要参与生物和非生物的胁迫应答(如水杨酸、渗透胁迫、菌核病等)，并且不同基因对不同胁迫的反应机理是不相同的在研究植物病毒基因功能、致病机理和转基因植物抗病毒机制等过程中[1,3,4,5]。目前，植物MAPK基因中大部分信号转导组分的胞内定位与响应的特异性，选择性剪接等都在逐渐被人们发现和认识[6]。本试验建立的转化体系能为研究番茄MPK2基因做出贡献，并且能进一步完善植物MAPK基因的功能和作用。 由于番茄的培养过程较为复杂、培养周期较长、基因转化效率较低，而烟草组织具有培养容易、培养周期较短、基因转化效率较高等优点，所以烟草能成为植物基因工程研究中重要的模式植物[7]。在植物基因工程中，目前研究最清楚、应用最广泛的外源基因转化方法是根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的遗传转化技术，在已获得的近200种转基因植物中约有80%是由农杆菌介导完成的[8]。近年来对MAPK基因研究主要集中在动物细胞，对植物MAPK基因研究和了解还很有限，需要近一步分析和测定，从而近一步完善MAPK级联途径模型。资料表明对植物MAPK C族基因的研究主要集中在拟南芥、玉米、水稻、豌豆和棉花等少数植物的相关基因序列分析和逆境胁迫应答上[2]。C族MAPK基因的种类和功能的分析也较为欠缺，而且番茄的MAPK基因的研究还比较有限，因此本体系的建立有利于研究番茄的MPK2基因与其参与翻译的蛋白质的特异性、细胞定位和选择性表达等。 (责任编辑：qin) |