N-琥珀酰壳聚糖的荧光素标记反应研究
时间:2018-03-07 16:15 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
| 摘要：琥珀酰壳聚糖是一种低毒的聚阳离子改性载体，具有广阔的应用前景。本论文探索了异硫氰酸荧光素标记琥珀酰壳聚糖的反应条件，通过对反应体系的pH和加料速度的控制，将标记率从1.33%提高到1.94%。随后进行 A549、H460和MCF-7 三种肿瘤细胞对荧光标记琥珀酰壳聚糖摄取率的测定，研究琥珀酰壳聚糖对肿瘤细胞的亲和性。将上述三种细胞分别与不同浓度的FITC-琥珀酰壳聚糖进行共孵育，通过测定细胞内荧光强度来确定摄取率，结果显示，H460对FITC-琥珀酰壳聚糖的亲和性最强。19394 关键词 肿瘤细胞 荧光标记 琥珀酰壳聚糖 摄取率 Title Study of FITC labeled N-Succinyl-Chitosan reaction Abstract N-Succinyl chitosan is a low toxicity, polycation-based carrier which has wider application prospect. This paper mainly studied the reaction conditions of fluorescein isothiocyanate labeled N-succinyl-chitosan for improving the labeling rate of fluorescent N-succinyl chitosan. By controlling of pH and the feed rate of the reaction system, the labeling rate increased from 1.33% to 1.94%. Then, the uptake rate of A549, H460 and MCF-7 tumor cell against N-succinyl-chitosan was determined. By culturing the three kinds of cell above, the concentration of FITC-succinyl chitosan was differed, and the uptake rate was determined by measuring the fluorescence intensity, the result showed that H460 has strongest affinity on FITC-succinyl chitosan. Keywords Tumor cells Fluorescently labeled Succinyl chitosan Uptake rate 目录 1、引言2 1.1壳聚糖作为药物载体的剂型-2 1.11壳聚糖纳米粒-2 1.12壳聚糖膜-2 1.13壳聚糖片剂2 1.14壳聚糖微胶囊-2 1.15壳聚糖微球3 1.2壳聚糖作为药物载体的应用-3 1.21壳聚糖作为消化道药物靶向载体-3 1.22壳聚糖作为抗肿瘤药物载体3 1.23基因运载工具-3 1.31 壳聚糖基因载体的大小及相关条件-4 1.32壳聚糖/DNA 载体的稳定性4 1.33壳聚糖/DNA 载体的转染能力-5 1.34壳聚糖及其衍生物转染效率-5 1.4 研究课题的提出和内容-6 1.4.1 研究课题的提出-6 1.4.2 研究内容-6 2 实验材料与方法6 2.1 材料与试剂-6 2.1.1 试剂-6 2.1.2 仪器-7 2.1.3 常用试剂配制-7 2.2 实验方法-7 2.2.1 琥珀酰壳聚糖的合成-8 2.2.2 FITC-琥珀酰壳聚糖的合成-8 2.2.3 荧光标记率测定-9 2.2.4 细胞培养-9 2.2.5 细胞冻存-9 2.2.6 BCA法测定蛋白浓度10 2.2.6.1蛋白标准曲线绘制10 2.2.7 FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定11 3 结果与讨论11 3.1 FITC-琥珀酰壳聚糖荧光标记率11 3.2 BCA法测定蛋白浓度12 3.3 A549细胞FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定13 3.4 H460细胞FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定15 3.5 MCF-7细胞FITC-琥珀酰壳聚糖摄取量测定27 结论-29 展望-20 致谢-20 参考文献-21 1、 引言 壳聚糖是一种资源丰富的新型天然高分子有机化合物，是一种物理、化学性质优良的多糖有机化合物，具有低毒性、易于吸收、组织相容性好、生物学活性多样等优良特点，是一种良好的天然药物释放载体【1】。下面介绍壳聚糖在作为药物缓慢释放载体时的生物学特点、类型及其在临床上的实际应用，其中作为基因运载载体的应用是近年来国内外研究的重点和热点。同时还展望了壳聚糖作为药物载体的良好发展前景。 1.1壳聚糖作为药物载体的剂型 1.11 壳聚糖纳米粒 纳米级聚合物作为药物传递载体和控释的载体，由于其微小的体积，高效的药物利用率和合理的体内分布，能够有效的通过组织上皮，从而有效地对药物进行靶向输送和控制释放，从而成为包埋多肽、核酸、疫苗、蛋白质等具有生物活性的大分子药物理想载体【2】 (责任编辑：qin) |