乙醛脱氢酶提取工艺的研究+文献综述(3)
时间:2018-04-02 11:56 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.2.4 乙醛脱氢酶与酒精中毒 饮酒后有些人会出现脸红、心跳加速、皮肤加热、血压升高的症状，这并不是由于血液中乙醇浓度的升高， 而是由于血液中乙醛浓度的升高造成的[3]。研究表明，乙醛具有强烈的毒理作用，可刺激肾上腺素、去甲肾上腺素等物质的分泌， 引起面红耳赤、心率快、皮温高等症状。人在饮酒后产生乙醛速度快，而氧化为乙酸的速度慢，故易产生乙醛蓄积中毒[4]。也就是说，乙醛脱氢酶的不足使乙醛在体内积累导致中毒现象。解酒重在加速乙醛的分解，使之产生乙酸进一步分解，而在此过程中乙醛脱氢酶的作用尤为重要。 1.2.5 乙醛脱氢酶于白血病 白血病是一种血液系统的恶性肿瘤，各个年龄段皆可能病发。将ALDH2基因导入K562细胞后研究发现：高表达的ALDH基因可以促进K562细胞的增殖，并能大大降低氧自由基引起的氧化损伤，这对乙醛脱氢酶基因在白血病细胞的生物学功能研究提供了实验基础，为白血病的治疗提供了一个新的思路。 1.3 乙醛脱氢酶在生物工程研究方面的应用 乙醛脱氢酶在微生物体内的纯化研究[5]，对一些化学产品的开发能起到引导作用。嗜热厌氧乙醇菌JW200为革兰氏阳性高温厌氧细菌，能够利用淀粉、木聚糖等作为发酵底物生成乙醇。由于它具有工业生产乙醇的能力，国外有研究通过分析乙醇代谢途径的各种关键酶深入研究乙醇生产代谢机理——乙酰CoA依赖型乙醛脱氢酶，该技术有助于填补国内此类酶研究的空缺，为提高乙醇产量提供了新的思路。 1.4 乙醛脱氢酶的研究进展 1999年，福利尼亚工学院和州立大学的Julianna Toth等教授多次分离纯化培养（培养温度35℃，时间10-12h）CLostridium菌株，经发酵后用3GA-agarose和Sephacry2 S-300柱层析得到了ALDH。同年，日本九州大学的Takeshi Nagai教授采用多种现代生物分离技术相结合的分离方法从飞鱼肝脏线粒体中分离得到了ALDH[6]。 2000年，美国Fabienne Remize 教授从酿酒酵母菌中分离得到了ALDH，同是实验结果还表明Mg2+对ALDH有激发作用，而K+对ALDH没有影响。 2001年，美国南伊利诺斯州大学的Yves等教授对一株沙门氏菌进行诱变培养，分离纯化得到了较高活性的ADH，同事也说明ADH和ALDH是乙醇在人体内代谢所必须的两种酶。华侨大学化工与生化工程系的研究者李夏兰，蔡婀娜曾讨论了从微生物细胞中提取乙醇脱氢酶。主要探讨了分别从醋酸杆菌发酵液和酵母细胞中提取乙醇脱氢酶的可能性。----- 2002年，荷兰Wai-Kwan Tang等教授通过高速离心，硫酸铵盐析以及a-cyanocinnamate-Sepharose、Affi-gel Blue agarose和SDS-PAGE柱层析得到了Mr为57.5kDa的ALDH。 2003年，瑞典卡罗林卡学院的L.HjeLmqvist教授通过高速匀浆处理原料，提取经高速离心、透析后的上清液依次进行柱层析，从甜菜中分离提取得到了ALDH9。 1.5 乙醛脱氢酶分离现状 生物技术产品一般都存在一个比较复杂的多项体系中，目前开发研究的生物产品的分离技术有很高的要求，分离与纯化部分的费用占总成本的50%以上。因此，研制出新的分离纯化方法很是重要。 目前，国内外采用的是传统的酶分离纯化方法，从动物和微生物中分离纯化得到乙醛脱氢酶，大致分为以下几种。 1.5.1 盐析沉淀法 蛋白质在稀盐溶液中，其溶解度会随浓度的升高而增加，这种现象被称为盐溶。但是当盐的浓度继续增高时，蛋白质的溶解度又以不同程度地下降并先后从溶液中析出，此种现象被称为盐析[7]。 (责任编辑：qin) |