医用级透明质酸提取过程中杂蛋白的去除(4)
时间:2018-05-03 22:39 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
因此，透明质酸可加速创面愈合。创伤早期的局部透明质酸浓度明显增高，并对多种炎性细胞有调节作用。高浓度、高分子量的透明质酸，具有较高的促愈合、调控胶元合成、调节纤文活性和抗炎等作用。而低分子量的透明质酸则能刺激血管生成。伤口中，在透明质酸酶的作用下，降解成低分子透明质酸，进而促进伤口愈合。 1.5 透明质酸提取工艺研究现状 发酵法生产的透明质酸具有分离精制容易，保湿性强，品质稳定，产量大等优点，目前已得到广泛使用，并已成为研究透明质酸生产的要方向。日本主要利用发酵法生产透明质酸[8]，利用现代发酵技术和发酵设备，使透明质酸发酵产率水平从2g/L～4g/L提高到6g/L[9]。目前，国际先进的透明质酸发酵产率为6g/L～7g/L[10]。我国透明质酸研究起步较晚，其发酵产率为4g/L～5g/L[11]，从发酵液到最终产品的纯化收率60%～70%[12]。 发酵液中分离提纯透明质酸主要有大量稀释膜滤法、高速离心法、氯仿法、乙醇沉淀法、季铵盐法等，离子交换层析与超滤法在提取发酵液中的透明质酸中也有一定的应用[13]。 目前较常见的方法或多或少存在着缺陷，如大量稀释膜滤法：由于发酵液中菌体等杂质较多，极易造成膜孔堵塞，而且大量稀释会造成操作体积太大。高速离心法除去菌体对设备的要求很高。氯仿法：菌体沉淀中夹带较多的透明质酸，透明质酸的回收率低，且氯仿对环境不友好。乙醇沉淀法是一种较为常用的方法，但由于此法所应用的车间及设备均必须防爆，这势必增加了操作的危险性和生产成本[14]。 1.5.1 过滤法 过滤法分离纯化发酵液中的透明质酸是一种简单有效并可以规模化生产透明质酸的分离纯化方法，可以有效地除去菌体和杂蛋白，对分子量的影响相对较小。如：利用三氯乙酸灭活菌体并使蛋白质变性沉淀，然后以硅藻土作为过滤助剂吸附、截留蛋白质和菌体的透明质酸发酵液的预处理方法。 虽然过滤法具有设备简单、操作方便、试验重复性好、成本低廉，且能有效去除蛋白质类杂质，但提纯效率相对还是比较低的，这种方法通常只用于透明质酸的初期分离纯化。 1.5.2 凝胶层析法 凝胶层析法是生物化学中一种常用的分离手段，凝胶层析是依据不同分离纯化目的和透明质酸分子量大小选择合适的分子筛进行分离纯化的，透明质酸分子量达几十万到几百万，而蛋白质的分子量仅为几万，所以选择合适的凝胶可以起到分离纯化的效果。 由于凝胶层析是基于被分离组分之间的分子量大小不同而起到分离的效果，这样就避免了化学方法纯化透明质酸过程中的pH、酶、光、热和还原剂等因素导致糖苷键的水解或分子间解聚，避免了黏度发生不可逆的下降。但凝胶层析法成本较高，且分离提纯透明质酸的提取率也比较低。 (责任编辑：qin) |