植物染色体标本的制备过程
时间:2018-05-29 21:32 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
| 摘要目前，通用的植物染色体玻片制备方法共分为两大类：一类是传统的盐酸解离法，盐酸破坏细胞结构，包括细胞壁， 破坏后自然会分开。一类是酶解去壁低渗法，低渗法原为人类和哺乳动物染色体标本的制备方法，后引用于植物。23491 盐酸解离法的方法比较老旧，在此只作大概的说明，此文重点讲解的还是后者的方法及制备。此法是陈瑞阳先生的去壁低渗法，但在某些步骤上有所改动。 去壁低渗法 低渗法原为人类和哺乳动物染色体标本的制备方法，后引用于植物。植物根尖分生组织细胞，经果胶酶和纤文素酶处理后，其中胶层的果胶质及纤文素构成的细胞壁被消化，成为游离的原生质体。然后用低渗溶液处理，使细胞核中的染色体，向细胞质中自然扩散，经固定、火焰干燥、染色，即可制备出染色体长度适中、集中而不重迭、各部分形态结构清晰的优良染色体标本。避免了压片法的缺点，特别适于染色体小且多的植物。毕业论文 实验材料 各种植物种子均可用。 四、实验器具和药品试剂 显微镜、温箱、冰箱、培养皿、镊子、小瓶、载玻片、酒精灯、切片架。 秋水仙素（或8-羟基喹啉）、KCL、2.5％的果胶酶和纤文素酶混合液、甲醇、冰醋酸、Giemsa原液（或卡宝品红）、磷酸缓冲液。 实验方法和步骤 (一) 材料培养 水仙在恒温条件下生根培养，待根尖长至0.5～1厘米时进行前处理。 (二) 前处理 切取0.5厘米长的根尖，用0.2％秋水仙素处理2小时，或用 0.002M 8-羟基喹啉处理2～4小时。取出处理材料,放入固定液(甲醛:乙酸=3:1)中固定，并放入4℃环境下，以待后用。 (三)前低渗 吸干预处理液，滴入0.075M KCL溶液，在室温下处理30分钟，其中更换低渗液两次。 (四)去壁 吸干低渗液，用蒸馏水洗一次，滴入2.5％果胶酶和纤文素酶混合液，以全部材料浸没为度，加盖，在30℃条件下处理2～5小时，其中将材料瓶轻轻摇动数次，促使酶反应充分。 (五)后低渗 吸干酶液(将酶液放到另一棕瓶置冰箱内保存，可反复使用)，用蒸馏水慢慢洗2次，然后在蒸馏水中静止10～20分钟，进行后低渗。 (优尔)染色 用卡宝品红溶液对材料进行染色，可过夜染色。 (七)制片 取根尖1个，放在清洁的载片上，加几滴45%乙酸溶液，用镊子将根尖挟碎，去掉残渣。轻放盖玻片，注意不要产生气泡，然后进行敲片，使得染色体均匀分布在玻片表面。 (八)镜检 将载片水洗后稍干，用显微镜找出分散好的染色体中期分裂相。 三、去壁、低渗法在细胞遗传学中的意义 1．在染色体计数和组型分析方面的应用 去壁、低渗法可使染色体分散得比较好， 即使是染色体数目多的材料，如甘薯、甘蔗、棉花、波萝等，染色体也能分散开，并且染色体铺展平整，便于计数和测量。我们利用此方法，曾对我国野生大豆、栽培大豆、野生稻161、栽培稻L3]、陆地棉D7、甘蔗等20多种植物的染色体组型进行了研究，都取得了比较好的结果。另外，应用去壁、低渗法，在一部分材料中，如栽培稻、野生稻、栽培大豆、野生大豆、甘蔗、谷子、柿子、桑、无花果等材料，经Giems。染色后，在前期一晚前期染色体的一定部位上显示有一种染色深的区域。这种着色深的区域与Giemsa C一带不同，为与其相区别，我们称此区域为染色体Giemsa染色区（ChromosomeGiemsa Region)。Giemsa染色区具有以下特点：(1)着色区域比较大，一般不呈带状或点状，有的涉及染色体的一个臂，或整个染色体，容易识别。(2）染色区比较稳定，处于分裂晚前期或前中期的染色体，大部分都能显示出这种染色区。(3）同源染色体所显示的Giemsa染色区基本上是相近的。根据这些特点，我们认为，Giemsa染色区，在核型分析时可以作为识别同源染色体的一种指标，从而可提高核型分析的准确性。 (责任编辑：qin) |