Sox2CreER转基因小鼠的基因型鉴定(2)
时间:2023-05-10 20:51 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
3。1。1 DNA采集 8 3。1。2 DNA提取 8 3。1。3 Thermo ND2000C测量DNA浓度 9 3。2 引物设计 10 3。3 聚合酶链式反应(PCR) 10 3。3。1步 骤: 10 3。3。2 PCR反应体系(30ul) 12 3。4 琼脂糖凝胶电泳 12 四. 实验结果 13 4。1小鼠特性与实验规范 13 4。1。1 小鼠的特点 13 4。1。2 饲养From优T尔K论M文L网wWw.YouERw.com 加QQ75201^8766 管理要求 15 4。1。3 小鼠基本操作技术 15 4。2 琼脂糖凝胶电泳成像分析 16 五. 总 结 17 参考文献 17 致 谢 18 一. 引 言 1。1 背景介绍 小鼠的 Sox2基因存在小鼠的第3 号染色体上。研究发现,Sox2和大多数Sox基因一样是单外显子结构,并且随机分散在整个基因组里,不形成基因簇。[3] 在胚胎发生过程中,Sox2基因表现出多种不同的动态的表达模式, 这和它在各种发育事件中起着重要作用是一致的[4]。在整个成熟的卵母细胞中可以检测到高水平的 Sox2 蛋白的表达[5],在2细胞期,Sox2 蛋白的表达转移到核内,从6~8细胞期一直到桑椹胚期,Sox2 蛋白的表达都主要在细胞核里,但细胞质里也有。而到了囊胚期时,在滋养外胚层细胞中,Sox2蛋白主要存在于细胞质中,而在内细胞团细胞中,Sox2 蛋白主要位于细胞核中,这说明母体 Sox2 蛋白的表达一直持续了整个着床前的发育阶段[6]。论文网 最早能在桑椹胚期的一些细胞里检测到Sox2基因的转录,之后Sox2基因在囊胚期的内细胞团中也有短暂的表达。卵圆柱期Sox2基因在外胚层和胚外外胚层表达。到了原条期即 6。5dpc,Sox2的表达遍布外胚层,而在紧接胚胎边缘的胚外外胚层呈带状分布[7]。在原肠胚形成早期,Sox2 基因在胚外的表达仅局限于绒毛膜,但是在胚胎里的表达却在前部外胚层,也就是将来产生神经外胚层的地方。在体外,Sox2还在未分化的胚胎干细胞(ES 细胞)、胚胎癌细胞(EC 细胞)中表达,并随着其分化表达下调[8]。 我们通过构建Sox2CreER转基因小鼠,使其与另一只小鼠XXX-loxp(CKO,条件敲除)的交配,得到的f1代既有Sox2CreER,又在XXX基因上有loxp片段。然后给它注射一种雌激素,tomaxifen。这个激素诱导Cre重组酶入核,把loxp片段中间的就敲除了。这样空间上,只有表达了Sox2的细胞才能表达Cre,才能敲除。时间上,什么时候打这个激素,什么时间开始敲除。这样在时间和空间上都可以做到控制条件进行敲除。文献综述 目前Cre-LoxP重组酶系统在小鼠基因打靶中被广泛应用,相比传统的转基因技术,应用该系统的基因敲除具有时空特异性,优化了转基因小鼠模型。应用Cre-LoxP重组酶系统构建的转基因小鼠可在小鼠局部实现基因敲除,很大程度上避免小鼠过早死亡,为后续研究提供可行性。 二. 实验试剂与仪器 2。1 实验仪器 仪器 生产厂家 PCR仪 C1000 TOUCH Thermal Cycler (责任编辑:qin) |