毕业论文移动版

绿小体的被膜有两部分主要结构：第一部分是基板层，第二部分是其他结构蛋白形成的膜结构。基板层的作用十分关键，它与细胞膜相连，含有大量细菌叶绿素a和蛋白质。而且它也可以进行捕光作用，而其他结构蛋白即使改变也基本不会影响绿小体的主要功能。论文网

随着分子生物学技术运用的日趋成熟，绿小体捕光天线复合物中色素结合蛋白的组成和功能研究取得了快速发展。目前已经初步认识到绿小体含有10种不同的蛋白，这些蛋白都位于绿小体的被膜上。有CsmA、CsmM、CsmN等含量丰富的蛋白，以及CsmP、CsmO、CsmY等其他几种蛋白。本文主要围绕绿色丝状细菌绿小体被膜蛋白中的CsmN展开研究工作。

2。材料与方法

2。1实验材料

Chloroflexus aurantiacus J-10-fl菌株由本实验室保存，在光照条件下维持继代培养。大肠杆菌感受态细胞Transl-Tl、大肠杆菌感受态细胞BL21 (DE3)购于Bio-Rad公司、表达载体pEASY-Blunt E2购于北京TransGen生物技术公司。

2。1。1主要实验仪器及规格

光照培养箱（PGX-250B）、高压蒸汽灭菌锅（MLS-3780）、超净工作台（SW-CJ-1BU）、电子天平(PL3001-S)、超纯水仪（Integral5）、制冰机（SIM-F140AY65）、恒温水浴锅（DK-8D）、恒温摇床（THZ-D）、高速离心机（5804R）、PCR仪（PTC100）、琼脂糖凝胶电泳仪（EPS 100）、凝胶成像仪（Gel-Doc2000）

2。1。2主要实验试剂

Tryptone、Yeast extract、氨苄青霉素、Glycyl-glycine、1Kb Plus DNA Ladder、2×TransHiFi SuperMix II、 DuRed、TAE、胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒

2。1。3主要培养基及试剂的配制

1) LB液体培养基

称量LB 培养基干粉（20g/L）1g，用量筒量取50ml超纯水。部分倒入250ml锥形瓶（提前放入转子），再加入称量好的LB 培养基干粉并将剩余的超纯水全部倒入，在磁力搅拌器上混合均匀。混匀后塞紧瓶塞，瓶口包上报纸，并用橡皮筋扎紧，放入高压蒸汽灭菌锅，121℃，20分钟。取出后置于4℃冰箱冷藏保存。

2）LB固体培养基

配制1。5%的培养基。称量LB Broth（20g/L）3g，Agar琼脂糖（25g/L）5g。用量筒量取200ml超纯水，部分倒入500ml锥形瓶（提前放入转子）。再加入称量好的LB Broth并将剩余的超纯水全部倒入，在磁力搅拌器上混合均匀。混匀后塞紧瓶塞，瓶口包上报纸，并用橡皮筋扎紧，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌，121℃，20min。灭菌完毕后待其降温至50℃即可制备平板。提前半小时打开操作台的紫外灯进行灭菌处理，将氨苄青霉素Amp+从-20℃冰箱中取出，放置于室温使其解冻。加1‰（即200μL）至LB固体培养基，轻轻晃动摇匀，避免气泡产生。向每个平板倒入20ml培养基，在操作台上轻轻摇晃使其均匀充满整个平板。全部完成后放置操作台上待其冷却凝固，并打开操作台的通风使其加速凝固。待其凝固之后用封口膜密封，置于4℃冰箱冷藏保存。

3）1%的琼脂糖凝胶

称量0。5g琼脂糖，量取50ml的TAE电泳液，分别倒入锥形瓶混合并摇匀。后将锥形瓶（倒扣一个小烧杯）放入微波炉中高火加热2min左右，使琼脂糖完全溶解，对着阳光看清澈透明没有颗粒物即可。待冷却至50℃左右微微烫手时，加入15μL染料混合均匀，倒入插制胶模具中（已插入样孔梳），等待冷却凝固。凝固后取出样孔梳，将胶板小心放入在电泳槽中，再加入适量TAE电泳液，使胶完全浸没在电泳液中。

4）Tricine SDS-PAGE凝胶的配制

将蛋白质电泳专用玻璃板装在制胶架上，先用洗瓶加入一定量超纯水，查看是否完全密封。若无水漏出，则证明密封性良好，再将水全部倒出。配制两块10%下层分离胶，配方如下：按顺序加入超纯水1。2 mL、45%Glycerol 3。0 mL 、Gel buffer（3X）3。0 mL、Gel Stock 1。8 mL、10%APS 20 μL，最后加入TEMED 10 μL。混匀后，用移液枪将混合胶液注入玻璃板空隙间，当液面上升距玻璃板顶端1。5 cm左右时停止注入，用洗瓶再注入一定量超纯水，压平液面并赶走多余的气泡。静置30 min左右待下层分离胶凝固后，将上层的水倾倒干净，再配制4%上层堆积胶，配方如下：按顺序加入超纯水2。5 mL、Gel buffer（3X）1。5 mL、Gel Stock 0。5 mL、10%APS 20 μL，最后加入TEMED 10 μL，并快速将混合液注入玻璃板空隙内直至将玻璃板铺满，然后插入样孔梳。静置10 min左右待上层胶充分凝固后，把玻璃板转移到电泳槽内，倒入电泳液，小心取出样孔梳，即可上样进行电泳。文献综述 (责任编辑：qin)