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2 研究方法

2。1。 大豆根中总 RNA 的提取（康为世纪康为世纪 RNApure Plant Kit）及检测 大豆根总 RNA 的提取（康为世纪康为世纪 RNApure Plant Kit）：

1）称取幼嫩大豆的根部材料 0。5 g，擦干表面水分用液氮速冻后迅速研磨成细粉，分装于 1。5 ml 的离心管中（约 0。3-0。4 ml 高度）。

注意：动作尽量迅速，避免 RNA 降解。论文网

2）加入 600 µl Buffer RL 和 6 µl β-巯基乙醇（100:1），涡旋振荡充分混匀，室温放置 5 min， 充分裂解。

注意：β-巯基乙醇气味难闻，刺鼻，最好是在通风橱或是通风口出处理。 3）将上述干净裂解液转入 2 ml Shredder Spin FL 管（RNase-Free，Collection Tube），4 ℃， 12000 rpm（~13400 g）离心 2 min。

4）上清转移到新的 1。5 ml 离心管中（记录上清的体积），加入 0。5 倍的无水乙醇，迅速混 匀，提取核酸。

5）将步骤 4）中的溶液转移到吸附柱 Spin Column RM 中，8000 g，离心 20 sec ，倒掉滤 液并将吸附柱重新放回收集管中。

6）加入 350 µl Buffer RW1  ，10000 rpm ，1 min，弃滤液。

7）配置 DNase 1 混合液：

总体积 µl RNase-Free Water（µl） 10 X Reaction Buffer（µl） DNase 1( µl） 提取样品数

80 52 8 20 1

注意：DNase 1 混合液不要提前配好，使用前配置，以便于保证其活性。

8）向吸附柱中加 80 µl DNase 1 混合液，20-30 ℃孵育 15 min。

9）加入 350 µl Buffer RW1  ，10000rpm 离心 1 min 。（冲洗除去降解的 DNA 小片段）

10）加入 500 µl Buffer RW2  （使用前已加入无水乙醇)，10000 rpm  ，15 sec 。

11）再次加入 500 µl Buffer RW2  （使用前已加入无水乙醇)，10000 rpm ，15 sec 。

12）倒掉收集管中的滤液，12000 rpm ，再次离心 30 min ，室温下 10 min 彻底晾干。 13）30 RNase-Free Water，室温放置 1min 后 ，10000 rpm ，离心 1min，保存于 -80 ℃超 低温冰箱中备用。文献综述

2。2。  大豆根中提取的总 RNA 反转录 cDNA

使用康为世纪 HiFiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit HiFiScript cDNA 第一条链合成 试剂盒 cw2569 合成 cDNA。

1）将 RNA 模板、Primer Mix、dNTP Mix、DTT、RT Buffer、HiFiScript 和 RNase-Free Water

溶解并置于冰上备用。