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在盐胁迫下水稻植株 一般都会表现出一系列如叶片卷曲、失水干枯 、无分蘖发生、产量下降死亡=。这种品种间存在的对盐浓度 的敏感度不同、表现差异或不同的适应能力，就是鉴定水稻种质耐盐性的基础 。耐盐大概有三种鉴定方法：(1) 在恶劣的盐胁迫环境中的生存能力就是水稻的耐盐性，植株生长量、活力等指标可以用来加以评价。可用在判定的材料对其指定的环境下潜伏的利用的价值，当然是可以有合理的一句调控水稻的品种。（2）供试品种对盐条件的敏感或迟钝程度也是可以映射出的，是判断在特别逆境条件下供试品种生产性能的优劣以及其适宜的能力 。(3)水稻的离体细胞对盐害的反应就是盐胁迫处理离体培养的水稻愈伤组织或悬浮细胞[4]，再比较其相对生物量或存活率，从而判定细胞抗盐程度(郭望模等，2003；祁栋灵等，2005)。抗盐程度(郭望模等，2003；祁栋灵等，2005)⑤。我们在前期工作中，分离到一个早衰突变体wad1。通过图位克隆和蛋白结构分析，我们发现WAD1可能参与逆境胁迫应答。为了验证我们的假设，我们拟通过NBT染色、二氨基联苯胺DAB检测和酶活检测等方法，验证突变体叶片中过氧化氢是否积累。结果发现与野生型相比，突变体wad1的耐盐性较野生型明显降低，而且叶片出现明显肉眼可以看到棕色斑点， 这表明突变体中有大量活性氧产生，而且WAD1的确参与盐信号转导。

2 材料与方法

2。1  实验材料

2。1。1 材料

本实验所用材料为甲基磺酸乙酯(EMS)诱变籼稻蜀恢所获得的早衰且叶片有斑点的突变体。

2。1。2 试剂

预冷的磷酸缓冲液（pH7。8）Met溶液 EDTA-Na2溶液 NBT溶液 核黄素溶液 PBS NaN3乙醇

2。2 实验方法

    （选取好的植株进行剥离，选取饱满未受过明显的机械创伤的优良种子，放入清水中发芽，早晚各换一次水，注意及时清洁水垢，等到水稻长出了根将其放入pcr板中在水槽中进行下一步培养，及时对其加水补充⑤，等到根有3厘米长的时候使用营养液（营养液配方母液500ml ））文献综述

2。2。1 DNA的提取

本实验采取TBS方法提取DNA，其方法如下：

(1)用剪刀取好5cm左右的水稻叶片放于2mL EP厚壁管当中，加入一粒钢珠作用是增大摩擦，并用液氮速冻且小心手冻伤，就放到全自动样品快速研磨仪中震荡研磨，设定频率35HZ，时间1min；拿出机器时候需马上打开管盖，防止爆管盖。

(2) 接下里要在磨好的水稻样品中都加入400μLtbsDNA提取液，震荡。在75℃水浴加热30min，每隔10min上下震荡一次；

(3) 在离心机中用12000 rpm离心10min，吸取上清液移到新的200μLEP管中；

(4) 在上述上清中加入等量200μL预冷过的异丙醇，上下颠倒混匀，在冰箱中放置5min，12000 rpm离心10min，去掉上清部分；

(5) 吸配制好的75%乙醇200μL到上述EP管中，用枪轻轻吸打使洗涤沉淀，8000 rpm离心5min，倒掉上清即酒精风干（20-30min），加入200μL ddH2O，震荡放置-20℃备用保存。