毕业论文移动版

通过序列对比、免疫沉淀、质谱分析等方法，研究人员最终分离得到拟南芥中的中介体复合物。拟南芥中介体共有21个保守的亚基和6个植物特异的亚基。MED25除了参与开花时间的调控外，还参与生物与非生物胁迫过程，与转录因子DREB2A（DRE-Binding protein 2A），ZFHD1（zinc finger homeodomain 1）和MYB-LIKE转录因子相互作用；MED25还参与器官大小调控。MED16亚基参与调控水杨酸和茉莉酸介导的抗性基因表达。激酶域的MED12和MED13参与了拟南芥胚胎发育和开花时间的调控。随着拟南芥中介体复合物的分离，不同中介体运行功能和分子机理逐渐被公之于众。

在上述基础上，我们采用PCR技术扩增拟南芥MED10基因，得到MED10片段并将其转入pCAMBIA1300-35S超表达载体中，构建了pCAMBIA1300-35S-MED10超表达载体，利用农杆菌介导的转化法，得到拟南芥MED10超表达纯合株系，从而进一步研究MED10的功能。论文网

3中介体复合物的研究现状

中介体复合物最先在酵母（Saccharomyces cerevisiae）中被发现，在真核生物转录激活过程中所必需的。据研究表明，从酵母到人类（Homo sapiens），所有真核生物的中介体复合物都是相当保守的。不同的生物有由不同个数的亚基组成，例如：酵母中介体含有25个亚基，其中核心中介体的稳定组成部分是21个亚基，由Srb蛋白亚群MED12、MED13、Cdk8、CycC形成一个特定的模块。然而，该模块在不同的中介体中出现的形式略有不同。总体来说，现今对酵母中介体亚基的组成已经研究得相当清楚了。

通过对酵母中介体复合物的研究，结合生化、遗传等方法，科学家发现，单个的亚基存在于一个包含四个不同模块的复合物中。由于中介体都具有基本的模块构架，因此，尽管其结构复杂，我们仍能根据其功能区分。人类的Mediator与酵母一样，也存在两种主要的形式。中介体不仅具有固有模块化可变性，而且还具有其他的异质性，这种表现在哺乳动物系统中尤为明显。另外，多细胞动物中介体复合物具有多动能性，其不仅与大量的生理进程有关，而且大量位点特异性的DNA绑定转录激活因子与各自的中介体亚基具有结构性互作。

中介体在植物中的研究，相对来说比较滞后，直到2007年才有相关报道拟南芥中分离出的中介体复合物。但是在后续的十年中，不断有植物中介体亚基的结构和功能以及分子机理被报道出来，譬如MED12、MED13、MED14、MED25、MED21等，相关研究成为热点，呈快速发展趋势。目前，科学家发现了中介体复合物在生长发育过程中的重要作用，因此，研究中介体亚基的工作十分具有现实意义和价值。

1材料与方法

1。1实验材料

1。1。1植物材料

拟南芥：哥伦比亚野生型品种Col-0 (Columbia)，为本实验室所保存。

1。1。2 菌株与载体

大肠杆菌（E。 coli）DH5α购买自GeneCopoeia 公司，Trans1-T1购买自TransGen Biotech公司；

pBI101。3-SUC2-GUS载体由本实验室提供；

pCAMBIA1300-35S-rbcs超表达载体为本实验室所保存。

1。1。3 试剂与仪器

1）分子生物学试剂：

限制性内切酶（BamHⅠ，SalⅠ-HF，Pst I，KpnⅠ，SacⅠ-HF），购买自 BioLabs 公司；

PrimerSTAR HS DNA Polymerase，dNTP Mixture，DNA Marker，T4 DNA ligase购买自 TaKaRa 公司；

质粒抽提试剂盒、凝胶回收试剂盒于Qiagen公司购买；

2×Taq MasterMix(含染料)购买自康为世纪公司；文献综述

2）常用化学试剂：

胰蛋白胨（Tryptone）、琼脂糖（Agarose）、酵母提取物（Yeast extract），NaCl 于 Sangon 公司购买； (责任编辑：qin)