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1 材料和方法

1。1 材料

实验材料： 本实验室培养成熟的反硝化颗粒污泥；模拟废水；四环素；PBS；坩埚；pMDTM19-T载体；DH5α感受态细胞；2×mix；氨苄青霉素；IPTG；LB培养基；DNA凝胶回收试剂盒；强力土壤DNA提取试剂盒；强力土壤总RNA提取试剂盒；SYBR荧光染料；反转录试剂盒

实验仪器： 匀浆研磨器；马弗炉；烘箱；定量PCR仪；振荡培养箱；高速离心机

1。2 方法

1。2。1 反应器运行设计

接种反硝化颗粒污泥（约0。5 L）于反应器中记为T，以含硝酸钠和葡萄糖的模拟废水为进水，于温度为35±1 °C、溶解氧 (dissolved oxygen，DO)浓度低于检测值的厌氧且避光培养条件下运行。运行稳定之后，向T反应器进水中逐步分段添加四环素，每个阶段持续2周，各添加阶段及相关剂量如表1-1所示。文献综述

表1-1 试验用抗生素添加阶段和浓度(mg L-1)

阶段 取样时间(d) Tetracycline(mg L-1) 样品名称

Stage 1 21 0。1 T1

Stage 2 35 0。2 T2

Stage 3 49 0。4 T3

Stage 4 63 1。0 T4

Stage 5 77 2。0 T5

Stage 6 91 4。0 T6

Stage 7 105 10。0 T7

Stage 8 119 20。0 T8

注：T反应器中未加抗生素的初始样品名称为T0。

1。2。2 样品采集

每个四环素添加阶段的末期，从T反应器中均匀取样，样品存放于-20 °C冰箱中待分析