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Western blot是半定量检测特异性蛋白的最常规方法。将47期蝌蚪进行视觉刺激培养，提取视顶盖蛋白。结合实验室的研究内容，针对一类组蛋白去乙酰化酶HDACs，选择合适的抗体进行Western blot检测。研究这些蛋白在视觉刺激后的含量变化，探讨视觉刺激过程中调控脑内视觉信息传递的分子机制，研究这些分子在视觉经验依赖过程中起什么作用，为后续实验提供理论依据。

2。1。1 非洲爪蟾介绍

从20世纪50年代以来，非洲爪蟾已经成为胚胎学、发育生物学、神经生物学、细胞生物学、功能基因组学等研究的重要模式生物。爪蟾作为一种经典的模式动物有如下优点：（1）作为一种脊椎动物，爪蟾比线虫和果蝇等更适合于用于人类疾病研究；（2）体外受精，排卵量很大，受精卵体外发育较快，器官发育过程可以直接观察；（3）卵较大，适合显微操作；（4）养殖成本非常低，注射人绒毛膜促性腺激素（HCG）可以促进排卵受精，一年四季皆可，适合大量繁殖；（5）一些重要基因与人类之间有较高的同源性，为人类基因功能和疾病研究奠定了坚实的基础。

本实验是以非洲爪蟾(Xenopus Laevis)作为模式动物，成年非洲爪蟾购自美国NASCO公司，雌雄成年爪蟾饲养在去氯自来水的爪蟾养殖系统内，水温保持在22℃左右，12小时白天/12小时黑夜的周期光调控。每周喂1次猪心和1次合成饲料。爪蟾配对时，通过对成年非洲爪蟾腹腔注射人体绒毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin, HCG ,雌蛙300IU，雄蛙150IU）, 之后将其放置于水箱内产卵，最后选取受精卵放置于22ºC的培养箱，等到蝌蚪发育到47期进行下一步实验。文献综述

2。1。2 实验试剂

10XTBST缓冲液 

Tris(MW121。14) 30。3g(或25mL 1M Tris-Hcl pH 7。5) 

NaCl 80。0g 

KCl 2。0g 

加入ddH2O至1000mL（调pH至7。5），溶解后室温保存。

1XTBST缓冲液

10XTBST缓冲液 100mL

蒸馏水 900mL

Tween-20 1mL

由于比较粘稠，吸取前Tween-20将枪口减掉一块，吸取时应缓慢防止气泡产生，加入溶解后室温保存。

配制500mL的10xPBS pH7。4

NaCl 40g

KCl 1g

Na2HPO4 7。2g

KH2PO4 1。2g

溶于400mL的ddH2O中，调节pH至7。4，最后加ddH2O定容至500mL，过滤，室温保存。