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2。3。2 样品采集 9

2。3。3 小鼠DNA的提取 9

2。3。4 Thermo ND2000C测量DNA浓度 10

2。3。5 引物设计 11

2。3。6 聚合酶链式反应（PCR） 11

2。3。7 PCR反应体系及反应条件 12

2。3。8 琼脂糖TAE凝胶电泳分离PCR产物 13

3 实验结果分析 13

3。1 琼脂糖凝胶电泳成像分析 13

4 总  结 15

5 参考文献 15

致  谢 16

1 引言

1。1 基因简介来自优Y尔L论W文Q网wWw.YouERw.com 加QQ7520~18766

    Lhx3基因是LIM同源盒基因家族中的一员，其蛋白产物是一种神经内分泌转录因子，是垂体发育和运动神经元特化所需要的。基因敲除实验表明Lhx3-/-小鼠垂体前叶六种细胞系中有四种缺失，而且Lhx3的功能无法由Lhx4来补偿[2]。故Lhx3是垂体形成和垂体前叶激素分泌细胞类型特化所必需的。此外，Lhx3和Lhx4以及Islet-1基因在脊椎运动神经元中瞬时表达，调控脊髓运动神经元细胞分化和轴突生长的多样性 。有人用标记的Lhx3基因的表达序列标签与人多种组织RNA点图进行杂交（Northen bolt），分析了Lhx3基因的表达情况，发现Lhx3基因在成年垂体、成年肺、成脑和脊髓中高表达，胚胎的脑、心脏、肾脏、肝、脾、胸腺和肺都未检测到表达。现今可利用RT-PCR的方法检测Lhx3基因在成年和新生大鼠、小鼠的几种组织中的表达情况，为进一步揭示Lhx3基因在组织分化和功能发挥中的分子机制提供了有益的思路。

    GFP,即绿色荧光蛋白，是一个由238个氨基酸残基组成的蛋白，在蓝色和紫外线波长范围内的光线刺激会发出绿色荧光，在细胞生物学与分子生物学领域中用作报导基因[3]。GFP荧光的产生具有自发性，可在体内或体外提供实时监测。野生型的GFP缺点明显，在对其的不断研究后，现今改进型的GFP在光强与热稳方面都显著加强。随着研究的深入，现在已经开发出多种GFP光谱变体，其中增强型黄色荧光蛋白与增强型蓝绿色荧光蛋白已应用于小鼠研究中[4]。由于ECFP和EYFP的谱线轮廓毫无相似及重叠之处，所以这两种荧光蛋白可共同显色并用做报导蛋白，这对体内双标记或荧光能量转移分析等研究是非常理想的。GFP的应用为当今生命科学基础研究提供了一个前所未有的高精度检测方法，标志着小鼠基因组改造技术的未来发展趋势[5]。论文网

2 实验原理、材料与方法

2。1 实验原理

本实验在小鼠局部实现基因敲除，获得GFP小鼠模型，而后通过杂交培育获得研究小鼠（即一代小鼠）。一代小鼠中有两种类型小鼠：GFP小鼠与野生型小鼠。GFP小鼠：二倍体基因组中，其中一个Lhx3基因中的3-5外显子经敲除被除去，但有一个利用Lhx3基因的启动子来表达的GFP基因；野生型小鼠：基因组中有两个Lhx3基因。而两个Lhx3基因均被敲除的小鼠在出生前就会死亡。 (责任编辑：qin)