利用CRISPR/Cas9技术定点突变拟南芥CRWN3基因(4)
时间:2018-07-17 21:03 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
②每 100 mg琼脂糖凝胶加入 300 µL Buffer DE-A，混合均与后，于 75 ℃水浴，每 隔1 min 摇晃一次，直至凝胶块完全融化； ③每管加 0.5 个Buffer DE-A体积的 Buffer DE-B，混合均匀； ④吸取步骤③中的混合液，转移到DNA 制备管中，12000 g室温离心 1 min，倒掉 滤液； ⑤将制备管放回 2 mL离心管内，加入 500 µL Buffer W1，12000 g，离心 30 s，倒 掉滤液； ⑥将制备管放回 2 mL离心管，加入 700 µL Buffer W2（确定加入指定体积无水乙 醇），12000 g，离心 30 s，倒掉滤液； ⑦再用 700 µL Buffer W2 洗涤一次，12000 g，离心1 min，倒掉滤液； ⑧将制备管置回 2 mL离心管中，12000 g空离1 min，以彻底弃掉滤液； ⑨将制备管放入一新的 1.5 mL离心管中，在制备膜中央位置加 30 µL 洗脱液EB， 室温静置溶解2 min，12000 g离心 1 min 洗脱 DNA； ⑩取 2 µL DNA 洗脱液用于琼脂糖凝胶电泳检测，-20 ℃保存备用。 (责任编辑：qin) |