安徽一猪场仔猪肠道大肠杆菌噬菌体的分离鉴定(2)
时间:2018-07-17 22:01 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1 材料与方法 1.1 试剂和仪器 1.1.1 试剂： 胰蛋白胨 Tryptone 购于 OXOID 公司 酵母提取物 Yeast Extract 购于 OXOID 公司 琼脂粉 Agar 购于 DSBIO 公司 1.1.2 试剂的配置： （1）PBS 缓冲液：NaCl 8g，KCl 0.2g，NaHPO4•12H2O 3.63g，KH2PO4 0.24g，加 H2O 至 1000ml，pH7.4 ，121℃ 20min 高压灭菌 （2）液体 LB 培养基:胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，氯化钠 10g，加 H2O 至 1000ml，pH7.4 ，121℃ 20min 高压灭菌 （3）固体 LB 培养基：每 1000ml 液体 LB 培养基加入 15g 琼脂粉，121℃ 20min 高压灭菌 （4）半固体 LB 培养基：每 1000ml 液体 LB 培养基加入 7.5g 琼脂粉，121℃ 20min 高压灭菌 （5）SM 液：NaCl 5.8g，MgSO4•7H2O 2g，1M Tris.Cl（pH7.5）50ml，2%明胶溶液（m/V）5ml，加 H2O 至 1000ml，121℃ 20min 高压灭菌 1.1.3 耗材： 0.22μm针头式过滤器 Millipore公司 20ml一次性使用配药用注射器 常州金龙医用塑料器械有限公司 1.1.4 仪器： 台式高速冷冻离心机 Kendro公司 涡旋振荡器 Scientific Industries 台式恒温振荡器 Crystal 公司 生物洁净工作台 苏州安泰空气技术有限公司 高温灭菌器 KAGOSHIMA SEISAKUSYO LSC 隔水式电热恒温培养箱 上海市跃进医疗器械一厂 微量紫外分光光度 Thermo 电子天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司 1.2 试验方法 1.2.1 采样和处理 猪场情况:安徽宝迪种猪场:规模约5000头基础母猪;品系为美系杜长二元猪;厂区虽然设备较旧,但卫生条件及生产管理较好。 采样：本试验选取断奶前和断奶后的仔猪为研究对象，选择安徽一猪场共10窝健康仔猪，每窝选取3只健康仔猪，采集5窝仔猪断奶前2天的粪样及5窝仔猪断奶后每天粪样（持续一周），混合其粪便，共10份样品，记录粪样的状态。 处理：取1g粪样与20ml PBS缓冲液混匀并握旋，5000 r/min离心10min，去掉固体，取上清液，再12000 r/min离心20min，取上清液。最后用0.22μm微孔滤膜过滤后待用。 (责任编辑：qin) |