绯红密孔菌固态发酵产漆酶研究(3)
时间:2024-01-20 16:48 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
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2。4。2 粗酶液获取 在无菌条件下，随机选择生长状态一致的菌丝体培养料1g，置于加入15mL醋酸缓冲液（0。2M，pH=4。5）的100mL三角瓶中，25℃，120rpm的摇床中浸提2h，4000 r·min-1离心10 min后取上清液，即为粗酶液。 2。4。3 可溶性蛋白测定文献综述 采用考马斯亮蓝G250法[16]。蛋白浓度在20μg·mL-1-80μg·mL-1之间，蛋白含量与吸光度值呈很好的线性关系，两者间的回归方程为：y=0。0062x+0。0081，相关系数r=0。9981。 2。4。4 酶活测定方法 漆酶活力的测定采用ABTS法[1]，以2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)为底物，量取2mLABTS，将3。2mLpH4。5的醋酸缓冲液和0。8mL稀释好的粗酶液混合，使反应总体积为6mL。测定反应前 3 min 内 420 nm 处每30s吸光值的变化，酶活定义为每mg蛋白中每分钟引起吸光度增加0。1所需要的酶量（U·mg protein-1） (责任编辑：qin) |