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2。配制反转录反应体系， 在离心管中加入4 μL 的dNTP Mix（2。5mM Each）， 2 μL 的Primer Mix，1 μL的RNA Template，4 μL的5×RT Buffer，2 μL的DTT（0。1M）和1 μL 的HiFiScript（200 U/μL），用RNase-Free water定容至20 μL。

3。涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

4。cDNA合成反应条件：

   1）若下游进行荧光定量PCR检测，42℃孵育15分钟，85℃孵育5分钟。

 2）若下游进行普通PCR检测，42℃孵育30-50分钟，85℃孵育5分钟。

5。反应结束后，短暂离心，置于冰上冷却。

6。逆转录产物可直接用于PCR反应和荧光定量PCR反应，或置于-20℃长期保存。