产木聚糖酶黑曲霉的ARTP诱变育种(2)_毕业论文

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产木聚糖酶黑曲霉的ARTP诱变育种(2)

    木聚糖酶不是单一的酶,而是一种多组分的复合酶系,是降解木聚糖半纤维素的一组酶的总称。根据这些酶的作用可将它们分为两组:( 1)酯酶, 主要指能降解木聚糖上木糖单元与乙酸形成的酯键的酶( 乙酰基木聚糖酯酶) , 或者能降解木聚糖上糖侧链残基与酚酸( 如阿魏酸或p- 香豆酸) 形成的酯键的一类酶 ( 2)水解酶,主要包括α- L-阿拉伯呋喃糖苷酶, 和葡萄糖醛酸酶, 能分别脱去取代在木聚糖主链上的阿拉伯糖基和4- O- 甲基-葡萄糖醛酸基;内切β- 1, 4- 木聚糖酶, 它能将木聚糖主链在随机地降解短链的低聚木糖; 外切- β- 木糖苷酶, 它作用于短链的低聚木糖, 以外切的方式从非还原性末端将低聚木糖切成木糖[4]。论文网

    微生物产生的木聚糖水解酶可将木聚糖降解为木糖、寡聚木糖和少量其它单糖。由于在造纸工业中, 木聚糖酶可用来提高木素溶出率,来预漂纸浆,减少化学漂剂用量, 从而改善纸张特性[5-6] , 故开发和研制木聚糖酶制剂的工作已受到世界各国的重视。木聚糖酶作为一种工业酶制剂在我国尚属空白。 在自然界中广泛存在的放线菌、真菌、细菌、酵母菌等微生物都可发酵产生木聚糖酶。黑曲霉作为公认安全的微生物,对人和动物都没有毒性,并且黑曲霉发酵周期短、生长迅速,且发酵过程不产生毒素、安全、可靠。同时,黑曲霉产木聚糖酶能力较强,该酶可以用来纸浆生物漂白,有利于减少环境污染,所以选用黑曲霉作为工业菌株具有明显的优越性[7 -8].

黑曲霉Aspergillus niger亦称无花果曲霉,作为一种常用的工业生产菌株,在世界各地的土壤、植物性产品和粮食中都广泛分布。该酶可产生多种酶类:如淀粉酶、酸性蛋白酶、果胶酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶等。黑曲霉作为公认的安全菌株,并且有着较强的产木聚糖酶能力[9],因此,在本实验中我们选用黑曲霉为出发菌株。

    常压室温等离子(atmospheric and room temperatureplasma,ARTP)诱变系统是近年来发展起来的微生物基因组快速诱变方法,是由北京思清源生物科技有限公司与清华大学联合开发的1 种新型微生物基因组快速诱变技术。ARTP诱变系统是利用等离子体中的活性粒子作用于微生物,使微生物细胞壁和细胞膜的结构及通透性改变,并引起基因损伤,进而使微生物基因序列及其代谢网络显著变化,最终导致微生物产生突变[10-11]。与常规诱变技术相比,ARTP具有射流温度低、产生的等离子体均匀、无需真空装置、操作简单、成本低、与生物大分子和细胞作用明显,操作安全性高,且对环境无污染等优点[12],前期实验结果表明,ARTP诱变技术对遗传物质的损伤机制多样,能够快速地突变真菌、细菌、酵母等微生物,获得多种突变型[13-15],所以ARTP诱变技术已成为快速突变微生物基因组的有效方法。研究表明,ARTP诱变育种技术可以快速地诱变细菌、微藻、真菌、酵母等多种微生物[16],使其获得遗传稳定性良好的突变株,突变率很高[17]。

2 材料与方法

2。1 材料

2。1。1 出发菌株 

诱变出发菌株为师范学院生物工程系实验室保存的黑曲霉菌株。

2。1。2 仪器文献综述

LS-78HJ立式压力蒸汽灭菌器:江阴滨江医疗设备有限公司;

SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台:苏州净化设备有限公司;

GNP-9080隔水式恒温培养箱GNP-9080型:上海精宏实验设备有限公司;

HYG-C多功能摇床HYG-C:苏州市培英实验室设备有限公司;

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