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目前，世界上产量最大的淀粉主要有玉米、木薯、马铃薯淀粉[5]，而玉米作为重要的粮食作物，若作为发酵生产的对象会对民众的日常饮食产生影响[6]。作为一种产量大，耐受性强的块根作物，木薯，是热带、亚热带地区重要的生物质能源植物。而其块根中的淀粉的为26%~34%，含量丰富，远高产于甘薯和马铃薯淀粉[7]，另外，木薯是非粮食产品，对土壤要求低，耐干旱、耐贫瘠，符合“不争粮，不争油，不争糖，充分利用边际性土地”的国家粮食发展战略[8]。因此木薯淀粉目前也是今后的一种极为重要的淀粉发酵的原料。本研究旨在从自然界中筛选出木薯淀粉糖化酶产生菌并对该菌的最佳碳源、氮源、矿质元素以及生长因子的种类和数量需要进行系统的发酵优化，以弄清该菌的最佳营养需求，并探究生温度、离子、pH对酶活性的影响。

2  材料与方法

2。1  材料

在淮安周边淀粉厂、米厂、庄稼地、食堂等地点采集土壤样品 

2。2培养基

发酵培养基：生淀粉10g、蛋白胨2g、NaCl 1g、(NH4)2SO4 2g、 K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 0。5g，FeSO4·7H2O 0。01g、CaCl2 0。1g去离子水定容1000mL，自然pH，121℃灭菌20min。其中生淀粉在110℃下干热灭菌4h，然后在常温下无菌操作加入   

斜面培养基：PDA马铃薯培养基

初筛平板培养基：木薯淀粉20g，蛋白胨2g，NH4NO3 3g, K2HPO4 1g,MgSO4`7H2O 0。5g, NaCl 1g，KCl 0。5g, FeSO4`7H2O 0。01g, CaCl2 0。1g, 曲利苯蓝50mg，琼脂15g，定容1L。其中木薯淀粉110℃干热灭菌12h后加入。

2。3方法

2。3。1菌株的分离筛选

称取土壤样品5g，接入装有发酵培养基的三角瓶中，放入摇床中摇瓶培养，30℃、150r/min条件下培养3-5d，取发酵液稀释10倍，将稀释液加入筛选培养基平板中涂布。30℃下培养2-3d，挑取菌落生长旺盛、透明圈明显的菌落划线至纯种，4℃保存。

再将上述方法分离得到的菌株接入装有30mL发酵培养基的三角瓶中，每株3瓶，编号，30℃、150r/min摇瓶培养3d取发酵液测定酶活，选择酶活高的菌株用斜面保存，作为后续发酵条件优化和酶性质研究的菌种。

2。3。2 粗酶液的制备

   挑取选斜面上长势良好的菌株于平板活化后接种于装有50mL发酵培养基的三角瓶中30℃ 150r/min摇瓶培养5d后，发酵液4500r/min离心10min取上清液即为粗酶液

2。3。3酶活测定文献综述

用pH5。0 Na2HPO4-柠檬酸缓冲液配制成2%木薯淀粉悬浊液作为底物，在50ml的三角瓶中以4mL底物，1mL粗酶液，置于摇床40℃，150r/min反应30min，，反应结束后将反应液在10000r/min，离心3min，取上清液用生物传感分析仪(SBA-40D，山东省科学院生物研究所)检测葡萄糖含量。 

酶活力单位定义：在上述条件下，1min产生1μg葡萄糖所需的酶量定义为一个酶活力单位，用U/mL表示。

2。4 酶的纯化

发酵结束后，发酵液经8000r/min离心10min，上清液用饱和度60%的(NH4)2SO4 沉淀，4℃静置过夜，离心收集沉淀，用pH5。0 Na2HPO4-柠檬酸缓冲液溶解，得到较高纯度的酶液