毕业论文移动版

共培养阶段是指将农杆菌与玉米幼胚一起在培养基上生活的过程，该过程是为了让农杆菌介导的外源性的遗传物质转移到玉米幼胚中，对玉米的基因型进行改变，共培养环境的改变可在一定程度上提高玉米转化效率，像温度、光照、pH、培养基所用成分都可以改变转化效率[3]。目前世界上对转基因玉米的关注度很高，在国内，农杆菌介导的玉米转基因还处于实验室水平，本文对玉米共培养阶段所使用的配方和其他方面进行改变，从而可以提高共培养阶段的效率，对接下来的培养有很大意义。

2 材料与方法

2。1 实验材料源C于H优J尔W论R文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ752-018766

本实验所使用的玉米材料是采摘自本农场内每年4~6月播种，7~9月人工授粉的AT59型玉米。

将储存在-70℃冰箱的原始农杆菌菌液，在含有Timentin(特美汀)抗生素的YEP平板上进行画线培养，28℃黑暗下培养2d。挑取平板上的单菌落加人含有Timentin(特美汀)抗生素的5mL YEP液体培养基中，在220 r／min，28℃的恒温摇床上振荡培养至对数生长期。将菌体按1：50的比例进行二次活化，活化好的菌液离心后用MSB液体重悬菌体，作为共培养液备用[4]。

2。2 培养基配方及配置

试验中所用的培养基的配置分为母液的配制和培养基的配制，因为培养基所用的化学成分种类较多，但是有的如Fe盐、RTV等，每次使用的量较少，如果单独每次配置的话，既麻烦又不准确，所以将这些制成母液，每次取所需要的量即可。

 N6大量（母液浓度20*）

CaCl2 ·2H2O KNO3 （NH4）2SO4   MgSO4·7H2 KH2PO4

2。506 56。6 9。26 3。7 8

N6大量的配制是：在一升的烧杯内加600~700ml的蒸馏水，置于磁力搅拌器上，称取2。506g的CaCl2 ·2H2O，待完全溶解后，依次称取另外四种成分，倒入蒸馏水中，待全都溶解后，定容到1L，倒入干净的已经用蒸馏水冲洗过的容量瓶中。

 B5微量(母液浓度100*)

MnSO4·H2O ZnSO4·7H2O CoCl2·6H2O CuSO4·5H2O Na2MoO4·2H2O   KI H3BO4

0。7579 0。209 0。0025 0。0025 0。025 0。075 0。300

 Fe盐（母液浓度100*）

FeSO4·7H2O Na2EDTA

2。78 3。73

 RTV (母液浓度100*）

氯化胆碱 核黄素(维生素B2) D-生物素 叶酸 烟酸

9。77 4。89 10。016 4。85 19。94

维生素B1 D-泛酸钙（维生素B5） 维生素B6 维生素B12 对氨基苯甲酸

47。222 (责任编辑：qin)