紫甘薯花青素抑制高脂诱导的肝脏内质网应激(3)
时间:2018-07-27 20:48 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.1.2仪器 冷冻高速离心机（德国Eppendorf 公司, 5810R型），高速匀浆器(德国IKA公司， T10 basic型)，水浴锅，凝胶成像仪(美国伯乐公司, Universal Hood II型)，水平电泳槽 (北京优尔一仪器厂，型号DYCP-31B)，转膜槽(北京优尔一仪器厂，型号DYCP-31B)，分光光度计(日本岛津公司，型号UV-2501 PC 型)。 1.1.3实验动物 八周龄的雄性 ICR小鼠40只（国家育种中心分公司，中国上海）。小鼠饲养于恒温恒湿条件下[温度(23°C±1°C)、湿度(60%)]，保持正常的进水进食，按12小时制设定光暗交替(光照时间8:30-20:30)。在进行一周的实验室条件驯化后，将小鼠随机分配成四组(每组10只)，各组进行如下处理，并连续处理20周：正常对照组(Control): 正常饮食（11.4%脂肪），每日灌胃PSPC的溶剂[0.1% Tween-80 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA)]。高脂组(HFD): 高脂饮食（60%脂肪），每日灌胃PSPC的溶剂。治疗组(HFD+PSPC): 高脂饮食（60%脂肪）,每日灌胃PSPC(700毫克/千克/天)。PSPC组: 正常饮食（11.4%脂肪）, 每日灌胃PSPC(700毫克/千克/天)。 1.2 实验方法 1.2.1 小鼠的血清及肝脏组织获取 小鼠眼球取血，冰浴冷凝1小时后离心分离获得血清（3000g，5min）立即实验或-80°C保存。颈椎脱臼法处死小鼠，立刻取肝脏组织并称重。保存于-80°C或直接用于实验。 1.2.2 肝脏组织匀浆的制备 将肝脏组织块按1：5与含有蛋白酶抑制剂的预冷PBS溶液混合，用组织捣碎机研磨（1200R/min）成匀浆后离心（4°C，12000g,20min），取上层清液。 1.2.3 蛋白质含量的测定 参照BCA蛋白浓度测定试剂盒说明书操作，计算样品的蛋白浓度。 1.2.4 ALT的测定 分光光度法测定血清ALT水平，测定方法参照试剂盒说明书（建成生物技术研究所，南京，中国）。活性表示为U/L。 (责任编辑：qin) |