番茄免疫受体蛋白Sw-5b与番茄斑萎病毒移动蛋白NSm互作分子机制研究
时间:2018-08-02 19:58 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
| 摘要：在过去的三十多年中，番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）造成的损失逐渐上升，引起农业研究工作者的广泛关注。本实验采用多种方法来研究番茄免疫受体蛋白Sw-5b与病毒移动蛋白NSm的相互作用。本实验利用免疫共沉淀、 荧光双分子互补、GST pull-down等技术对Sw-5b各结构域与NSm相互作用情况进行初步研究。实验结果表明，Sw-5b N末端结构域NTD1与NSm能发生直接物理互作。对抗性基因Sw-5b识的研究，可为番茄斑萎病毒抗性的研究与防治提供行之有效的策略，也为对番茄斑萎病毒属的防治提供借鉴。26622 毕业论文关键词：番茄斑萎病毒；免疫受体Sw-5b；移动蛋白NSm；互作 Molecular mechanism of tomato immune receptor Sw-5b interacting with the movement protein NSm of tomato spotted wilt virus Abstract：Tomato spotted wilt virus(TSWV) is mainly harmful to tomatos , and every year it causes a huge influence in the production of China and world . This experiment uses some methods to research the interaction between the movement protein (NSm) and plant immune receptor protein Sw-5b . This experiment uses Co-Immnunoprecipitation(Co-IP) and BiFC and GST-pull down technique to to do an initial scan of the interaction between every domains of Sw-5b and NSm . The results indicate that , the end of Sw-5b N structural domain NTD1 can occur Physical interactions with NSm . This research can provide basis for a further acknowledge of mechanism to Sw-5b recognizes TSWV , and offer theoretical basis for TSWV of resistance study, prevention and treatment . Key words: TSWV；immune receptor Sw-5b；the movement protein NSm ；interaction 目 录 摘要： 1 关键词： 1 Abstract： 1 Key words: 1 引言 1 1 材料与方法 3 1．1 材料 3 1.1.1 植物材料 3 1.1.2 菌株和质粒 3 1.1.3 主要试剂 3 1．2 方法 3 1.2.1 目的基因的扩增和克隆 3 1.2.2 载体的构建 4 1.2.3 重组质粒转化根癌农杆菌GV3101 4 1.2.4 根癌农杆菌注射烟草及瞬时表达 4 1.2.5 蛋白提取及免疫共沉淀 4 1.2.6 SDS-PAGE及Western blot检测 4 1.2.7 融合蛋白的诱导表达与纯化 4 1.2.8 Sw-5b和NSm分子相互结合的BiFC分析 5 1.2.9 GST pull-down实验 5 2 结果与分析 5 2.1 蛋白互作情况的检测 5 2.2 Sw-5b和NSm分子相互结合的BiFC分析 6 2.3 GST-NTD1融合蛋白的诱导表达与纯化 6 2.4 NSm-His融合蛋白的诱导表达与纯化 7 2.5 GST pull-down试验 7 3 讨论 7 致谢 8 参考文献： 9 番茄免疫受体蛋白Sw-5b与番茄斑萎病毒移动蛋白NSm互作分子机制研究 番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt virus，TSWV）在病毒性病原物种中，是最具有危害性的一种。它属于番茄斑萎病毒属（Tospovirus），布尼亚病毒科（Bunyaviridae），而且它在世界范围内进行广泛为害，侵染多种经济作物[1]。已经确定的寄主主要有番茄，优尔椒，花生，莴苣等（Goldbach and Peters, 1994）。进行控制侵染是非常困难的，不仅因为它可以侵染多种植物，同时，它还以多种蓟马为传播媒介。其中最主要的传播媒介是西花蓟马（Frankliniella occidentalis）[2]。中国在2003年检测出西花蓟马，随后也在全国迅速扩散，在四川、云南、广州等地的多种观赏植物上检测到。因为番茄斑萎病毒是通过昆虫介体来传播的，因此能够有效防治番茄斑萎病毒的方法是筛选培育抗病品种，同时也更加经济、安全、有效。 (责任编辑：qin) |