木霉T-soybean几丁质酶功能分析(2)
时间:2018-09-23 20:48 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
本次实验所用的木霉T-soybean为本实验室从大豆根部分离，而且已经成功从该菌株中克隆出几丁质酶基因并转入了拟南芥中。 1.材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验用菌 本次实验所用的木霉T-soybean为本实验室从大豆根部分离。 1.1.2 培养基 PDA培养基：土豆200g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，pH6.0定容至1L； 产酶培养基：土豆200g，几丁质9g，pH6.0，定容至1L（根据研究的因素不同，几丁质浓度和pH值均有所变化）。 1.1.3 实验试剂 几丁质（10g）：索莱宝 胶体几丁质制备（10g/L）：称取1g几丁质添加2mL蒸馏水充分研磨，然后转移到烧杯中并添加18mL浓盐酸混匀，4℃放置24h然后用化学分析滤纸过滤到50mL的蒸馏水中，再用氢氧化钠溶液调定至pH7.0，最后用蒸馏水定容至100ml并至于4℃的环境保存[8]。 DNS溶液（使用前一周配制好）：取500mL的dH2O，然后依次称取酒石酸钾钠、3, 5-二硝基水杨酸、氢氧化钠分别是182g、 6.3g、21.0g，在50℃加热搅拌直至溶解，再称取5.0g的苯酚搅拌直至完全溶解,冷却到室温后定容至1L，贮于棕色瓶，室温中保存[9]。 考马斯亮蓝R-250染色液：向烧杯中加入1g考马斯亮蓝，然后依次加入异丙醇，冰醋酸，蒸馏水分别为250mL，100mL，650mL，最后搅拌混匀，过滤除去不容物质，室温保存[10]。 (责任编辑：qin) |