新分离H9N2亚型禽流感HA、NA基因的测序分析及其免疫学实验研究(4)
时间:2018-10-26 14:50 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.1.3 禽流感病毒 H9N2禽流感病毒,为本实验新分离保存毒株，分离于江苏某养殖场。 1.1.4 培养基和溶液的配制 LB 液体培养基：Tryptone 10g，Yeast Extract 5g，NaCl 10g；称量上述成分于1000mL 容量瓶中，加入去离子水定容至1000mL，121℃高压灭菌 20min。 Amp＋/K＋LB 液体培养基：于 LB 液体培养基中，加入氨苄青霉素/卡那霉素至液终浓度为100µg/mL。 Amp＋/K＋LB 固体培养基：称取 1.5g琼脂粉， 倒入 100mL 液体培养基中，在121℃的条件下高压灭菌 ，时间20min，冷却至50℃左右，加入氨苄青霉素/卡那霉素使溶液的最终浓度为 100µg/mL，浇制平板。 IPTG：在8mL水中加入2g IPTG，使其溶解，用去离子水使溶液的体积到 10mL，用0.22um 一次性滤除菌。分装成 1mL 小份，在-20℃的条件下保存。 10%过硫酸铵： 称过硫酸铵1g，倒入10mL去离子水后使其融化，在4℃的条件下保存。 5×SDS-PAGE Loading Buffer：1M Tris-Hcl（PH6.8）1.25mL，0.5g SDS，25mg BPB，25mL甘油，加去离子水定容至5mL，分装后保存于4℃。 考马斯亮蓝染色液：称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。 考马斯亮蓝脱色液：量取醋酸溶液100 ml，乙醇溶液50 ml共同倒入1 L烧杯中，加入去离子水到1L混匀后使用（边加边混匀）。 50×TAE Buffer：称取242g Tris，37.2g Na2EDTA•2H2O下列试剂于1L烧杯，加入800mL去离子水，充分搅拌溶解，加入57.1ml的醋酸，充分混匀。使用时稀释50倍。 1.1.5 动物免疫实验材料 8-12周龄的健康SPF小鼠 20只，雌雄各半；H9N2亚型的灭活疫苗；注射器若干只；ELISA板；包被液（PH6.3的碳酸盐缓冲液）；PBST；底物缓冲液；3% H2O2；显色剂；终止液；MTT、电子天平、PBS液、二甲基亚砜、无菌针头过滤器、细胞计数板、台盼兰、无菌操作台，CO2培养箱，酶标仪，－20℃冰箱。 (责任编辑：qin) |