水稻黄叶突变体的生理分析与基因定位(3)
时间:2019-03-31 11:45 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
（8）加40-100µlTE缓冲液或灭菌的双蒸水溶解DNA。 （9） 测DNA浓度。 1．3．2 分子定位与基因定位 选择均匀分布于12条染色体上的135对SSR和Indel标记，在yl1/窄叶青8号F2群体中选出10株黄叶个体，与两个亲本一同进行PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，找出与黄叶表型基因连锁的标记，通过标记的筛选可将目标基因定位于某条染色体上，再用该连锁标记及其附近的标记对F2中的黄叶个体进行连锁验证，从而将目标基因确定在比较具体的某一区间上。 1．3．2．1 PCR反应 （1）PCR反应体系（25µl） cDNA（10ng/µl） 2.0µl Primer （2pmol/µl） 1.0µl 10×Bufferfree （MgCl2） dNTP（2.5mM）MgCl2 （25mM） 11µl Taq （5u/µl） 0.25µl ddH2O 11µl 总体积 25µl （2）PCR反应程序 PCR反应参考Chen等的方法[7] ，略作改动。 step1 95℃ 5min step2 95℃ 30sec step3 55℃ 30sec step4 72℃ 30sec step5 go to step2 34cycles step6 72℃ 5min step7 10℃ 保存 1．3．2．2 PCR产物的检测 （1） 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (责任编辑：qin) |