G6Pase在SHSY5Y细胞分化后的鉴定
时间:2019-04-26 21:55 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
| 摘要：帕金森病是中枢神经系统退行性疾病，主要病变原因是多巴胺(DA)含量降低。本实验以GDNF诱导SHSY5Y细胞分化，通过鉴定G6 Pase含量的变化来检验SHSY5Y细胞是否分化为DA细胞成功。34894 毕业论文关键词：帕金森病 SHSY5Y细胞 DA Identify the G6 Pase after the SHSY5Y cell differentiation Abstract: Parkinson's disease is a degenerative diseases of the central nervous system, the main reason is that dopamine (DA) content decreased. In this paper, the SHSY5Y cells were induced by GDNF to dopaminergic neurons, identified by G6 Pase to test whether the SHSY5Y cells differentiation into DA. Keywords: Parkinson's disease SHSY5Y cell DA 前言 帕金森病（PD）是一种由锥体外系功能障碍引起的慢性中枢神经系统退行性疾病，症状主要为肌强直、运动迟缓和共济失调，严重者有记忆障碍和痴呆等症状。1817 年，第 1 例 PD被英国医生James Parkinson报道［1］。 PD的主要病变区域是中枢神经系统的黑质-纹状体多巴胺能神经通路，该通路受阻时DA合成减少，含量降低，造成多巴胺能神经功能减弱[2] 。研究发现，该病有两种治疗机制，一为内源性的神经干细胞的内在基因调控，二为外源性的体外提供化学诱导剂或细胞因子诱导。Mimura 等［3］证实了通过脑内多巴胺能神经元的移植来改善PD动物模型的行为学。Piccini和Lindball 也做了相似的研究［4，5］。 GDNF即胶质源性神经营养因子，能支持、保护和修复多巴胺能神经元, 也对神经干细胞分化为多巴胺能神经元起作用，还对运动神经元、神经细胞和外周神经组织也有一定的作用[6,7,8]。在多巴胺能神经元区域，GDNF分布广泛，也表达在嗅结节、梨状区等［9］。PD的特征是多巴胺能神经元的缺失，而SHSY5Y细胞具有和神经干细胞相似的分化能力，具有多巴胺能神经元的特点，如:合成多巴胺和去甲肾上腺素，表达多巴胺转运蛋白( DAT) 等，且易得到[10]，对研究神经细胞来说，是一种较为理想的细胞模型［11］。Gage［12］提出，神经干细胞是可生成神经组织（或者来源于神经系统的）具有自我更新能力,且能够通过不对称细胞分裂产生新细胞。本次实验是通过检测G6 Pase来判断SHSY5Y细胞是否分化成功，G6 Pase是多巴胺能神经细胞中一个功能性蛋白，若其含量上升则说明分化成功。 实验部分 1 实验材料 实验试剂:SDS-PAGE凝胶、10％过硫酸铵、SDS-PAGE电泳液、转膜液、DAB混合液、洗涤液、封闭液、一抗和二抗稀释液、β-actin、山羊抗兔lgG优尔根酶（二抗）、一抗（G6 Pase）、蛋白Marker、蛋白。 实验仪器：SDS-PAGE电泳设备；转膜仪；脱色摇床；显影暗室；移液枪。 2 实验步骤 2.1 前期工作的准备 无菌洁净室用75％酒精浸泡过的棉球擦拭；移液枪枪头高压灭菌；玻璃板洗净烘干；配制电泳液：Tris粉末15.1g、Glycine（甘氨酸）94g、SDS5.0g，用蒸馏水定容至1L；配制转膜液（要冷藏）：Tris粉末3.03g、Glycine14.42g、甲醇150ml，用蒸馏水定容至1L。 (责任编辑：qin) |