不同浓度CdCl2、ZnCl2对酿酒酵母基因组的影响
时间:2019-04-27 20:10 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
| 摘 要：以安琪酵母为材料，用酵母完全培养基（YPD培养基）进行培养。通过稀释涂布平板法挑选出纯菌落。经过镜检之后，选取活性高的菌株进行扩大培养。对培养至对数期的酵母，用不同浓度的CdCl2,ZnCl2 对酿酒酵母进行48 h胁迫处理，对刺激处理后酵母进行活细胞/死细胞计数比，观察生长曲线，并破碎酵母细胞壁，提取酵母基因组DNA,对处理过的酵母DNA进行凝胶电泳实验。34986 毕业论文关键字：酿酒酵母;CdCl2; ZnCl2; 胁迫处理;基因组 Different Concentration of CdCl2,ZnCl2 Effect on Saccharomyces Cerevisiae Genome Abstract: The experiment used Angel yeast as the material, Yeast was incubated by yeast culture medium (YPD medium). Through the method of dilution coated tablet single yeast colony was selected. After a detection, the yeast strain were cultured in YPD medium. The yeasts were cultured to the logarithmic phase of yeast, and were stressed with different concentration of CdCl2, ZnCl2 for 48 h. The stressed yeast cells were counted, and yeast cells wall were broken, yeast were extracted genomic DNA and analyzed using DNA gelectrophoresis technique. Key words: Saccharomyces cerevisiae; CdCl2 ; ZnCl2 ; Stress treatment; The genome 目 录 摘 要 1 引言 1 1. 材料和方法 2 1.1 实验材料 2 1.1.1 菌株 2 1.1.2培养基和缓冲液（YPD培养基） 2 1.1.4主要仪器 4 1.2 实验方法 4 1.2.1酿酒酵母活化 4 1.2.2 酵母的初筛 4 1.2.3 酵母的复筛 5 1.2.4 酵母菌的鉴定 5 1.2.5酵母菌的扩大培养 5 1.3酿酒酵母的胁迫处理 5 1.3.1用不同浓度的CdCl2，ZnCl2溶液对酵母进行胁迫处理 5 1.3.2不同浓度的CdCl2，ZnCl2溶液培养下酿酒酵母活细胞与死细胞计数比值 6 1.4酿酒酵母的破壁处理 6 1.4.1酿酒酵母破壁条件的确定 6 1.4.2酿酒酵母的破壁 6 1.5酿酒酵母基因组DNA的提取 6 1.6酿酒酵母基因组的琼脂糖凝胶电泳 7 2.结果与分析 8 2.1酵母菌的活化 8 2.2酵母菌的初筛 9 2.3酵母菌的复筛 9 2.4酵母菌的鉴定 10 2.5酵母菌的胁迫处理 11 2.6酵母基因组DNA提取 14 3.结论及展望 14 参考文献 15 致谢 17 不同浓度CdCl2、ZnCl2对酿酒酵母基因组的影响 引言 镉（Cd）是一种广泛的环境污染物，是危害性很大的“五毒”元素之一，对自然界和人类具有很大的毒害作用[1-2]。Cd的毒性包括线粒体损伤，以及通过细胞凋亡或坏死导致的细胞死亡。Cd通过抑制DNA错配修复系统和其他DNA修复系统而干扰基因组的稳态，此外，还造成脂质过氧化今儿影响硫氧还蛋白、还原性谷胱甘肽和液泡分泌系统的活力[3-5]。 锌（Zn）是人类和动物体内的必需微量元素之一，其参与体内120多种酶的生物合成，同时还调节300多种酶促反应，涉及蛋白质、核酸、激素、能量等代谢。而镉与锌的相似性，使其能在体内替代那些处于酶活性中心的锌元素，从而导致一系列效应。 酿酒酵母是现今科研上经过深入研究“模式生物”之一，具有细胞生长快、易于培养，遗传操作简单等原核生物的特点，随着酿酒酵母基因组序列信息的不断积累和测序工作的不断完成，酵母基因组学的研究重点已由传统的结构基因组学发展到了功能基因组学，被广泛的应用于真核生物基因工程的研究，并由此更系统地去了解真核生物生命活动的本能。本研究以酿酒酵母为实验材料，研究浓度的CdCl2,ZnCl2对酿酒酵母基因组的影响，进而推动有关重金属对真核生物基因组影响的研究[6-8]。本研究采用液体培养（YPD液体培养基）的方式，测定不同浓度的CdCl2,ZnCl2对酿酒酵母基因组的影响。采用液体培养的方式，从安琪酵母中分离纯化酿酒酵母，扩大培养后接种到含不同浓度CdCl2, ZnCl2的YPD液体培养基中培养48 h，然后测出不同浓度下，酿酒酵母的生长曲线，死亡率，进行酿酒酵母基因组DNA的提取。 (责任编辑：qin) |