高羊茅再生体系的建立(2)
时间:2019-07-30 12:40 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
从 20 世纪 90 年代开始，高羊茅组织培养方面的研究得到很大发展，所使用的外植体材料涉及到未成熟的胚、幼穗和下胚轴等[4-6]。但是，与成熟的种子作为外植体相比，存在成本高且受季节限制等缺点。而以高羊茅成熟种子作为外植体，材料易保存并且一年四季都可以使用。所以本课题的目的在于构建高效稳定的再生体系，探究不同处理对再生过程的影响，为高羊茅的遗传转化提供基础。 1 材料与方法 1.1 实验材料 本试验于 2015 年 1 月份到 5 月份进行。以高羊茅的 11 个品种“金刚钻”、“可奇思”、“星火”、“大联盟”、“猎狗 5 号”、“太阳神”、“要塞”、“佛浪”、“雅典娜”、“黄金岛”、“瑞星”的成熟种子作为外植体。 1.2 培养基 1.2.1 基本培养基 基本培养基为 MS 培养基，其中添加 3 % 的蔗糖，0.6 % 的琼脂。pH 值调为 5.8 ，于 121 ℃ 下高压蒸汽灭菌 15 分钟。 1.2.2 诱导培养基 在 MS 基本培养基中分别添加 2.5 mg/L 和 7.5 mg/L 的 2,4-D 作为诱导培养基。pH 值调为 5.8 ，于 121 ℃ 下高压灭菌蒸汽灭菌 15 分钟。 1.3 设备和仪器 主要设备：磁力搅拌器、高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、电子天平、恒温培养箱、pH 计等。 主要仪器：量筒、酒精灯、培养皿、三角瓶、烧杯、竹签、镊子、刀子、纱布等。 1.4 试验方法 1.4.1 材料脱皮 采用另作改进 Yue Q 等人[7]所使用的方法，对作为外植体的高羊茅成熟种子进行脱皮。取一定量成熟的高羊茅种子, 放在 50 % 的硫酸溶液中，用磁力搅拌器匀速搅拌 20 分钟，进行脱皮处理后用自来水冲洗适当时间除去硫酸。 1.4.2 材料消毒 采用另作改进的 Yue Q 等人[7]所使用的方法，对作为外植体的高羊茅成熟种子进行消毒。将经过脱皮处理的高羊茅成熟种子，放入安替福民溶液(活性为 10 %)中，磁力搅拌消毒 15 分钟，倒去安替福民溶液。再在超净工作台上用 75 % 无水乙醇处理 1 分钟，无菌水冲洗 6 至 8 次后备用。 (责任编辑：qin) |