番茄WRKY22与WRKY25基因沉默载体的构建(3)
时间:2019-08-21 12:36 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
2.2.2 cDNA的合成 （1）取0.5 mL EP管，加入1-5 μg总RNA，补充DEPC H2O至11 μL。在管中加1 μL10μM Oligo（dT）18 ，混匀后离心。 （2）将离心管放于70 ℃水浴10 min，冰上放置1 min。 （3）依次加入以下试剂：25 mM MgCl2 2 μL，10×PCR buffer 2 μL，0.1 M DTT 2 μL，10 mM dNTP mix 1 μL，摇匀后离心。 （4） 将上步EP管42 ℃水浴2-5 min。加入1 μL SuperscriptⅡ，42 ℃放置50 min。 将离心管置于70 ℃恒温15 min以终止反应。 （5）将1 μLRNase H加入置于冰上的EP管中，37 ℃水浴20 min。将cDNA保存于-20 ℃备用。 (责任编辑：qin) |