番茄白粉菌筛选拟南芥RNAi干扰库(2)
时间:2019-09-03 12:54 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
1.实验材料与仪器 1.1实验材料 番茄白粉菌为本实验室保存的中国生理小种（Oidium neolycopersici）。 拟南芥RNAi干扰库种子，由周口师范学院植物遗传与分子育种重点实验室提供。 1.2实验试剂 潮霉素；MS培养基；10%次氯酸钠；无水乙醇；DAB染色剂；冰醋酸；台盼蓝染色剂。50mg/mL的潮霉素溶液；固定液（无水乙醇:冰醋酸=3:1）；0.3%的台盼蓝溶液，DAB溶液（1mg/mL，pH3.8）。 1.3实验仪器 一般用正立显微镜；超净工作台；光照培养箱；电热恒温水槽；电子天平；冰箱。 2.试验方法 2.1拟南芥RNAi干扰库种子消毒 将拟南芥RNAi干扰库种子250、350在无菌操作条件下种植到玻璃皿中，利用潮霉素浓度千分之一的MS固体培养基筛选出正常的突变体植株。具体操作如下：首先，在超净工作台中，干扰库种子250、350先用75%无水乙醇消毒30-60s，用灭过菌的蒸馏水冲洗4-5次；其次，用2%次氯酸钠对种子消毒10min，之后用无菌水冲洗5-6次，充分洗掉次氯酸钠后，将突变体种子250、350种植到事先准备好的含有50mg/L潮霉素的MS培养基上，分别标记，封口；于4℃冰箱春化2-3d后，放入光照培养箱进行萌发。待萌发出两片真叶时即可移至灭过菌的营养土盆中栽种。 (责任编辑：qin) |