光合细菌对小麦幼苗双酚A胁迫的缓解效应(3)
时间:2019-09-17 12:50 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
在小麦幼苗期处理7d后，取小麦植株同位叶的叶片测定生理生化指标（光合速率、蒸腾速率、气孔导度、二氧化碳吸收率、叶绿素含量、可溶 性糖含 量、PPO活 性、P OD活 性、CA T活 性、M DA含 量）。 1.4 仪器和设备 HH-S型水浴锅 巩义市英峪予华仪器厂 SpectrumLab22PC分光光度计 上海棱光技术有限公司 GZX-9240MBE电热恒温鼓风干燥箱 上海博讯实业有限公司医疗设厂 SW-CJ-2FD洁净工作台 上海博讯实业有限公司医疗设备厂 LDZX-40KBS型立式电热压力蒸汽灭菌锅 上海申安医疗器械厂 TG16台式高速离心机 湖南仪器仪表总厂离心机厂 1.5 小麦幼苗生理生化指标的测定 小麦幼苗光合参数用便携式植物光合测定仪测定；叶绿素含量的测定采用丙酮和95％乙醇(V:V为1:1)浸提分光光度法[15]；可溶性糖含量的测定采用蒽酮比色法[16]；PPO活性的测定采用分光光度法[16]；POD活性的测定采用愈创木酚法[17]；CAT活性的测定采用紫外分光光度法[18]；MDA含量的测定采用硫代巴比妥酸（TBA）法[19]。 1.5.1 叶绿素的测定 1.5.1.1 实验试剂 无水乙醇，80%丙酮，碳酸钙，石英砂 1.5.1.2 操作步骤 （1）取样：剪去小麦幼苗叶片，将表面的污渍清理，用剪刀剪成小片，称取0.2g，放进混合浸提液（无水乙醇：丙酮=1:1）的25mL容量瓶中，分别在液面上升的刻度处划一记号，盖上瓶塞。放在40℃温箱中浸提24h，浸泡至叶片发白，用浸提试剂定容至所划记号处，摇匀备用。 （2）吸光度测定：取提取液小心倒进光径为1cm的比 色 皿里面进行比色。以浸提试剂为空 白测 定吸光度。分别测定OD652值。 1.5.1.3 结果计算 叶绿素含量用以下公式： 叶绿素总量（mg/g）=(OD652/ 34.5)×（V/W）×1000 式中： V：植物样品稀释后的体积(mL)； W：小麦幼苗的鲜重(g) 1.5.2 可溶性糖含量的测定 1.5.2.1 实验试剂 乙醚；草酸钠；饱和醋酸铅；葡萄 糖标 准溶 液：称量放在80℃烘箱里面烘到重量不变的葡 萄糖100mg，配出500ml溶液，则可得到每ml含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂：称取1g提纯过的蒽酮，用1000mL的稀硫酸进行定容。测定时现配现用。 稀硫酸溶液：用760mL浓硫 酸（比 重是1.84)定容到1000mL可得到。 1.5.2.2 操作步骤 (1) 可溶性糖的提取 称取重约1.0g的小麦幼苗叶片，在研钵里面加入少量乙 醚，细致的磨出细腻的匀浆，放进烧杯里面，再缓慢倒进温度为70 ℃的蒸馏水洗涤研钵中残留物质，将经蒸馏水冲洗过的物质一并倒入烧杯内，之后加入蒸镏水30~40mL。把烧杯小心的放进水浴锅里面受热，保持温度70~80℃约半小时，等到溶液至室温后加入饱和的中 性醋 酸铅溶 液，等到加进去的醋酸 铅不能够再出现白色沉淀就停止加入。然后将此混合物连同残渣一并 洗进100mL容量瓶，加入蒸馏水直到达刻度线为止，充分的进行振 荡。用经过干燥的漏斗把溶液过滤到三角烧瓶中，在瓶子里面先放进一些草酸 钠的粉 末，去掉滤液里沉淀的醋酸 铅，去除掉成为固态了的草酸 铅，再次过滤一次溶液，最后得到的无色溶液就是可溶 性 糖的待测液。 (责任编辑：qin) |