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在大豆的整个生育时期均有检测到大豆疫霉根腐病的发生，同时可侵染大豆的任何部位，大豆发育不同时期的症状有些许差异。易被大豆疫霉根腐病菌感染的品种在苗期被侵染的病状为：幼苗茎基部下胚轴会软化、褐色、出现水渍形状，叶片的颜色变黄失水萎蔫，旁边的根会变烂，主要的根转为深褐，在其真叶期受到侵染的症状为水浸状，子叶颜色黄色。[10]。

故治理大豆疫霉根腐病最好的办法是选育和使用抗病品种。使用目前先进的技术和方法，将我国各个地方所发现的大豆疫霉进行分离并测定其毒力型同时分析，有助于更加合理高效的利用抗病基因；对黑龙江大豆疫霉进行研究，弄清该地区大豆疫霉的特点；对其进行抗病性分析，为利用抗病品种进行防治提供理论基础。

1  材料与方法

1．1  土样采集

在黑龙江省佳木斯大豆种植区，选择地势低洼或着发生过大豆疫霉根腐病的大豆生产区田地，在大豆田四周及中央部位，收集大豆植株根部四周的土壤大约200cc，相同田块的土壤样品要拌匀并带回实验室约100cc。放置于室内晾干，除去土样中植物组织和小石块等杂物，在灭菌过的研钵中研磨成粉状，放在纸袋中置于室温下保存，每份土壤样品保存两份。

1．2  培养基的制备

1．2．1  基础培养基的制备   

美国Campbell公司生产的，以8种蔬菜为主要成分混合制成的罐装V8汁作为主要原料，加入去离子水配置成10%的V8培养基，于 250ml 三角瓶中分装，每个三角瓶装 200ml，在高压条件下蒸汽灭菌。

1．2．2  选择性培养基的制备    

将未完成的基础培养基的温度降至50℃左右时放入超净工作台中分别加入氨苄，利福平，五氯硝基苯，控制其最终浓度分别为：50ppm、50ppm、50ppm。

1．3  供试大豆幼苗的准备

将感病大豆品种Williams播种于填装有蛭石的塑料花盆中，放在 24-28℃、14h 光照/10h 黑暗的温室中生长，待10天左右真叶完全展开后，用打孔器将真叶制成叶碟(d=1cm)

将鉴别寄主大豆播种于填装有蛭石的塑料花盆中，在每盆中种两个品种，每个品种至少种80粒种子，遮光处理，放入24-28℃的温室中生长，3天后取长势良好的黄花苗洗净用于接种。鉴别寄主分别为：Harlon(Rps1a)、Harosoy13XX(Rps1b)、Williams79(Rps1c)、PI103091(Rps1d)、Williams82(Rps1k)、L76-1988(Rps2)、Chapman(Rps3a)、PRX146-36(Rps3b)、PRX145-48(Rps3c)、L85-2352(Rps4)、L85-3059(Rps5)、Harosoy62XX(Rps6)、Harosoy(Rps7)、PI399073(Rps8)。感病对照品种为Williams。

1. 4  大豆疫霉菌的诱捕分离

采用叶碟诱捕法，取约10g研磨好的土壤样品，均匀的平铺在灭菌培养皿(d=9cm)中;缓慢的向每皿加入无菌水，使得土壤均匀湿润但培养皿中无积水，盖上盖子后用Parafilm膜密封。在25℃、12h光暗交替的条件下倒置孵育5-6天，然后加入无菌水，并用镊子将液面漂浮物清除干净，并使液面高出土面约5mm适宜；接着立即加入准备好的大豆叶碟，每个皿20-30片，盖上盖子后放置于24℃、12h光暗交替的条件下诱捕24-48h。将叶碟取出后用无菌水冲洗数次，将其放置于另一培养皿中培养，向培养皿中加入约25ml无菌水，在24℃、12h光暗交替条件下培养24-48h，显微镜下观察叶碟边缘是否出现大豆疫霉菌游动孢子囊。若出现，则该土样确定为阳性土样。