中国石龙子应激基因MT、Bcl-2和P53的克隆与特征分析(2)
时间:2020-01-13 19:17 来源:毕业论文 作者:毕业论文 点击:次
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本文通过基因克隆技术克隆出了中国石龙子MT、Bcl-2和P53的cDNA序列全长，希望能为今后对中国石龙子应对环境压力的分子机制研究提供帮助。 2 实验材料和仪器 2.1 实验动物 本次实验所选用的动物为爬行动物--中国石龙子，于2014 年4月下旬捕捉于浙江丽水三岩寺，并且均为雄性性成熟个体。先将中国石龙子室温驯化一周，使其适应环境条件的细微变化。再将其分别饲养在长×宽×高=60cm×44cm×36cm的大塑料箱中，箱子底部铺有5cm的沙石并且在60%的土层表面上覆盖草皮和泡沫蛋壳，保证饲养箱内30%的沙土湿润，并且提供充足的水和面包虫，室温保持恒定22℃，12h光照，12h黑暗，以备后续实验使用。 2.2 实验相关试剂以及试剂盒 1.主要试剂 试剂 购买公司或品牌 超纯RNA提取试剂盒 康为世纪 凝胶回收试剂盒 康为世纪 pUC-T质粒 康为世纪 DH5α感受态细胞 全式金公司 X-gal 上海生工 IPTG 上海生工 DNA green 天恩泽基因科技公司 PCR试剂盒 全式金公司 氯仿 Abcam公司 引物 甘油 上海生工 上海生工 PrimerscriptTM First-strand cDNA Synthesis Kit TaKaRa公司 SMARTerTM RACE cDNA Amplification Kit SYBRR Premix Ex TaqTM Clonetech公司 TaKaRa 不同浓度的酒精 国药集团化学试剂有限公司 超快核酸电泳液 天恩泽基因科技公司 2.相关溶液的配置 （1）LB培养基 蛋白胨 10g 酵母抽提物 5g 氯化钠 10g H2O 1L 固体培养基加入10g琼脂粉`优尔~文[论]文'网www.youerw.com，121℃，高压灭菌20min。 （2）100mg/ml氨苄青霉 1g氨苄青霉素，加入10ml无菌水中，过滤灭菌，分装后-20℃保存。 （3）200mg/ml IPTG溶液 2g IPTG加入8ml无菌水中溶解后加水定容至10ml，用0.22μm滤器过滤除菌，分装后-20℃保存。 （4）20mg/ml X-gal 用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml溶液，用0.22μm滤器过滤除菌，分装后-20℃保存。 2.3 实验仪器 仪器 生产公司或品牌 水平摇床 上海一恒心 凝胶成像仪 Tanon-4200 PCR扩增仪 LonGene MG96 超微量核酸蛋白测定仪 ND2000基因有限公司 生化培养箱 中科美菱YC-260L/YC-300L 超净台 微波炉 上海博讯实业有限公司 格兰仕WBBH1012 纯水仪 上海和泰仪器有限公司 生化摇床 华利达HZ-2411K 移液器 Eppendorf 组织匀浆器 (责任编辑：qin) |